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药材黄柏中多种成分检测

jhjs

2015/08/31

中药/天然药检测

药材黄柏中多种成分检测

黄柏是一种中药材，属于芸香科植物黄皮树的干燥树皮。味极苦，略咸。具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮、滋阴降火等药物疗效。是治疗湿热泻痢、带下阴痒、涩痛火旺、脚气痿躄、劳热躁汗、阴虚遗精、疮疡肿毒、湿疹湿疮等病症良药。
黄柏中含有丰富的药物成分，其中以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱为主。这两种成分也是药典中明确要求检测的项目。同一药材中的这两种成分药典检测方法还不一样，下面我们就来看看。
高效液相色谱法检测药材黄柏中盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱含量。
实验部分
【原理】
精密称取适量黄柏样品经流动相溶解，超声提取后注入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）计算，得出所测成分含量。
【仪器及试剂】
仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+自动进样器+在线脱气机等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平（0.0001），药典筛（三号筛、四号筛）等。
试剂：乙腈（色谱纯），磷酸（分析纯），十二烷基磺酸钠（优级纯），超纯水等。
这两种成分的结构及特性及药材中的含量等差异可能有些大，药典中的方法是分开检测的，下面我们先来检测黄柏中盐酸小檗碱。
【样品制备】
对照品溶液制备：精密称取盐酸小檗碱对照品2.5mg于25ml容量瓶中，加流动相溶解、定容，制成0.1mg/ml盐酸小檗碱对照品溶液，备用。
供试品溶液制备：取黄柏药材适量，充分粉碎后过药典筛三号筛，精密称取过筛后粉末0.1g置于100ml容量瓶中，加流动相80ml，超声处理40分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，0.45um有机相微膜滤过，待测。
【色谱条件】
检测器：紫外检测器
检测波长：265nm
色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )
流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=50：50（V：V）
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：5μl
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：

下面我们再来检测黄柏中盐酸黄柏碱。
原理、仪器及试剂和上面一样，在此略过。
【样品制备】
对照品溶液制备：精密称取盐酸黄柏碱对照品2.5mg于25ml容量瓶中，加流动相溶解、定容，制成0.1mg/ml盐酸黄柏碱对照品溶液，备用。
供试品溶液制备：取黄柏药材适量，充分粉碎后过药典筛四号筛，精密称取过筛后粉末0.5g置于具塞锥形瓶中，加流动相25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再次称定重量，用流动相补足减少的重量，摇匀，0.45um有机相微膜滤过，待测。
【色谱条件】
检测器：紫外检测器
检测波长：284nm
色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )
流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=36：64（V：V）
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：5μl
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：

药典这个方法有些麻烦，对于成分不是特别复杂的药材大可不必这样，两个方法合并成一个方法完全可以搞定。下面我们就来看看。
原理、仪器及试剂和上面一样，在此略过。
【样品制备】
对照品溶液制备：精密称取盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱对照品各2.5mg于25ml容量瓶中，加流动相溶解、定容，制成0.1mg/ml盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱混合对照品溶液，备用。
供试品溶液制备：取黄柏药材适量，充分粉碎后过药典筛三号筛，精密称取过筛后粉末0.5g置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再次称定重量，用流动相补足减少的重量，摇匀，0.45um有机相微膜滤过，待测。
【色谱条件】
检测器：紫外检测器
检测波长：
序号时间（min）波长（nm）
1 0 285
2 17 285
3 17.1 265
4 30 265
色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )
流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=40：60（V：V）
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：5μl
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：

这样一个方法很方便的就把两种成分检测了出来，效果还不错。但由于这两种成分在该条件下的响应值和在样品中的含量有很大的差异，这样就导致一个色谱峰很大另一个偏小，对检测结果和色谱效果都有一定影响。
这样检测时我们就得考虑样品中多种成分在同一条件下的响应值及各自的含量，这两个因素如果差异不大，用同一种检测方法检测完全没问题。但如果差异较大，实验对结果准确度要求又不太高，这种方法就非常有优势，检测方便、快速。但如果对结果的准确度要求很高，这种方法最好别用，以防得不偿失。
同一样品检测方法很多，各有优势，实验时我们一定得立足现状，充分考虑样品及实验具体情况，满足实验要求是第一位的，切不可盲目的追求快而丢了准，或是盲目的追求准而浪费了时间、经费和精力等。
实验要求第一位，切记！
以上是个人点小小的心得，仅供参考。

分
该帖子已被版主-加30积分，加2经验;加分理由:原创参赛奖励

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symmacros

第1楼2015/08/31

应助达人

避免零回帖。

0

jhjs

第2楼2015/08/31

谢谢，明天可能会有人回帖
symmacros(jimzhu) 发表:避免零回帖。

0

土老冒豆豆

第3楼2015/09/01

应助达人

对一些精密度准确度要求不是太高的，可以二法合一。

0

上党之巅

第4楼2015/09/05

应助达人

这个方法同样适用于穿心莲的检测，需要将检测器的波长设程序改变一下，就可以。

0

xiaoxu

第5楼2015/10/22

学习一下

0

晓帆恋海

第6楼2017/04/09

算是挖坟吗。。
每当想创新的时候，就想起药典那句话，仲裁时应以药典标准为准，唉。。
还有一个问题是关于精密称定的，应精确至所取重量的千分之一，取对照2.5mg×1‰＝0.0025mg，我的理解是需要如此精确度的天平来称吗？我们的天平是0.00mg级的，平时一般必须称重在10mg以上，以满足千分之一的精密度要求。这样理解是否正确呢。。。求科普。。

1

ylz197726

第7楼2017/04/11

多年前，我也做过，似曾相识。

0

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