方法开发比较简单,可以逐渐改变有机相比例,寻找合适的分离度,譬如从90%开始,80%,70%,一步步的做下去,保留时间也可以预测。之前提到过“三倍法则”:有机相比例每变化10%,保留因子k就变化3倍,k等于(t-t0)/t-t0,如figure 1,柱子规格是100 mm × 4.6 mm ,流速是 2 mL/min,那么t0等于0.5*10*0.46*0.46/2,约等于0.5min,那么60%和50%的k分别是 7和19,1,大约是3倍的关系,所以对于等度洗脱的方法,可以容易的预测保留时间随有机相的变化幅度