HPLC测定兽药（恩诺沙星），色谱柱变短了，怎么不出峰呢？

柱子变短，应该是缩短了出峰时间，你可以再试试调节一下水相与有机相的比例！调高水相，延长出峰时间，可以验证一下3分钟时候的峰是不是被测物质。

你的国标出峰没有看到。
这个实验如果是我来做的话，会按照国标的条件走一个样品，看看有没有出峰。然后根据时间做出流动相和流速的调整。进的样品比国标的量高出10%试一下。不知道楼主目前做的结果如何？希望得到你的反馈

我第一次做荧光检测，目前实验室只有短柱子，国标流动相是0.05mol/磷酸./三乙胺：乙腈=82：18。实验室很多东西没有，我的流动相只是水-乙腈。磷酸和三乙胺应该只是让峰型好看点，对保留时间的影响不大吧。
水-乙腈=70:30，出峰时间大概是3min
水-乙腈=80:80，出峰时间是6min左右。
我觉得都太靠前了，就调成了90:10，就跑不出东西了。
我还调整了进样量10ul、20ul都做了，越做越乱。
不知道咋搞的。过两天把图谱拿来，请大家帮忙分析下。

我再去试试把对照品浓度加大，或者把乙腈改成甲醇试试、

荧光检测与紫外检测，在操作上要求没什么差别。你再耐心的配置个梯度浓度的标样，进样看看，相关性如何？最好重新配置一个流动相，比例按国标就行！

应助达人

沙星类磷酸三乙胺做流动相更好些

无图无真相

我做沙星用的流动相3.4mL磷酸定1000mL，再加3mL三乙胺，出峰挺好的呀，主要是环丙 达氟 恩诺 沙拉。比例就是18:82