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  • moshanghuakai
    2016/03/20
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 目标化合物的结构:

    仪器:Waters H-class
    色谱柱:BEH Amide, 2.1*100mm, 1.7um
    用的条件:1. A相:10mM甲酸铵/甲酸, pH3
    B相:已腈。
    温度:35度
    样品稀释液:流动相
    结果:峰很宽,拖尾(如图1)

    2. 换条件(因为BEH amide 柱推荐用碱性条件)
    A相:10mM 碳酸氢氨/氨水, pH10.6 (柱子pH 范围2-11)
    B相:已腈
    温度:35度
    梯度:0mim, 10%A+90%B; 5min,50%A+50%B; 9min, 90%A+10%B; 11min, 90%A+10%B, 11.1min, 10%A+90%B; 16min 10%A+90%B. 结果如图2:

    但是,多跑几针之后,结果就变成了下图,就是峰上鼓出个包:

    现在的问题是,即便使用第二钟方法,但梯度稀释后做标曲,峰面积不成比例,或高或低。想听听各位高手的意见,拜托拜托了。我已经辛苦做了几个月了。再拜,再拜。
  • 该帖子已被版主-夏天的雪加2积分,加2经验;加分理由:鼓励发帖
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  • lhy86725

    第1楼2016/03/20

    你样品有很多酸性基团,碱性基团,亲水基团,你用的是亲水模式色谱柱,这里面作用力很复杂,对于你这样品,我觉得你可以先加大碱性流动相A的比例试试

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  • 夏天的雪

    第2楼2016/03/21

    应助达人

    从图上看貌似碱性条件更适合分析,看梯度条件能否再优化一下

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  • 有水有渝

    第3楼2016/03/21

    应助达人

    10mM甲酸铵/甲酸, pH3改为用30mM磷酸二氢钾/磷酸 PH3试试,有机相分别试一下乙腈与甲醇,如果还拖尾,加入0.05%三乙胺(PH3)试试。另外看不到峰强度,不知道进样浓度会不会太大。

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  • hujiangtao

    第4楼2016/03/21

    应助达人

    正相柱子要多平衡一会儿

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  • moshanghuakai

    第5楼2016/03/27

    各位大神们,我这几天忙着实验,没上来。现在回报最新结果,我试了,pH=2.2 和 pH=10.8, 峰都是严重拖尾。不知道该怎么做了。hilic柱不是要求物质成离子状态吗?这两个极端环境下,这个化合物一定是离子状态啊,但是还是不行啊。

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  • moshanghuakai

    第6楼2016/03/27

    100uM,进样5ul, 峰高为25mAU. 峰很低啊。

    有水有渝(xky0230699) 发表:10mM甲酸铵/甲酸, pH3改为用30mM磷酸二氢钾/磷酸 PH3试试,有机相分别试一下乙腈与甲醇,如果还拖尾,加入0.05%三乙胺(PH3)试试。另外看不到峰强度,不知道进样浓度会不会太大。

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  • lhy86725

    第7楼2016/03/27

    确保碱性条件下,起始A的浓度在放低一点,HILIC模式下水相越高,出峰越快,5min的水相比例也在低一点,减弱洗脱能力试试看看

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  • 有水有渝

    第8楼2016/03/28

    应助达人

    先加扫尾剂试试

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  • moshanghuakai

    第9楼2016/03/29

    加了三乙胺扫尾,0.05%,效果不好,主峰直接裂成很多个分不开的小峰了。

    有水有渝(xky0230699) 发表:先加扫尾剂试试

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  • lijing320323

    第10楼2016/04/17

    这是类似ATP的结构吧,可以参考药典的方法,改变流动相

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