微聊ABC 经典小荟萃——0402

一片枫叶

2016/04/09

私聊

液相色谱（LC）

1：反相系统换正相流动相需要注意什么——安捷伦液相-涛
微A：反相系统换正相流动相需要注意什么？我把保护柱换正相的，我记得反相和正相的密封垫也不一样。
微B：确认你泵头的柱塞杆密封圈是peek的还是石墨的，如果是peek的需要更换成石墨的，peek不耐二氯甲烷，并做加压磨合处理。
微C：正己烷和乙腈、甲醇不互溶；异丙醇和正己烷、甲醇、乙腈均互溶。切换的时候注意不溶的两种溶剂不能相互冲洗。必须用异丙醇过度，异丙醇的粘性较大，使用时应注意压力，调整流速。
微D：正相系统和反相系统其实根本的原因是水，因为硅胶遇水会失活，所以主要是考虑替代水相的。因此在转换时，常用异丙醇过度，原因是异丙醇极性适中，正反相都合适。
一般液相都是反相体系的，因此材质上考虑的都是反相体系常用材质，所以正相溶剂对其仪器可能会造成影响甚至损坏，更换前一定要仔细厂家其仪器是否适用于正相系统。例如：氟橡胶，一般泵头都有密封，常用的密封材料为氟橡胶；氟橡胶不耐丙酮和乙酸乙酯等，使用会导致其氟橡胶变性，没有弹性，材料变脆不耐磨。
微E：注意你的脱气机，一般脱气机只适用于反相，要问工程师，我知道岛津的和沃特世的就不能用正相，除非换脱气机配件。
2：想问下液相的用水，超纯水，电导率大于十八，我想问如果达不到这个要求，那么会对柱子产生具体什么影响——Donna
微A：想问下液相的用水，超纯水，电阻率大于十八，我想问如果达不到这个要求，那么会对柱子产生具体什么影响？
微B：超纯水：既将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大于18MΩ*cm，或接近18.3MΩ*cm极限值。
微A：因为有时候超纯水机接的水的电导率达不到18，最近发现使用的C18柱子刚用不久峰型对称不好，PH值也在柱子的使用范围，连续坏了好几根柱子，是水中的什么离子影响了什么？
微C：你超纯水机的交换柱脏了，应该换掉。
微A：那这个不达标的水里是怎么影响这个柱子分离de，是氯离子/金属离子或者什么东西高了影响了哒？流动相为一酸胺水溶液/甲醇，我们是检测机构，方法是没有问题的。
微D：氯离子容易腐蚀不锈钢管路。重金属离子能跟一些组分发生络合反应导致拖尾，重金属离子到硅胶柱里很难去除的，会影响硅胶基的均相结构，尤其是高价阳离子。
3：C18色谱柱检测是最大分子量——化工检测-丫头
微A：听说c18 最高做的分子量大概就2000。
微B：不一定，首先跟孔径有关，60A的可能也就到2000,100A的估计5000左右，另外,还跟聚合物的空间构象有关。
4：液相测有关物质、自身稀释一百倍不成比例、是正常还是不是正常——技术-昆明-洛桑
微A：液相测有关物质、自身稀释一百倍不成比例、是正常还是不是正常？
微B：线性范围没有覆盖呗，理论上正常，但是对于一个方法来说不正常。
微A：因为我的东西比较纯、所以不清楚到底有什么影响？
微B：线性范围做过没，如果以前做过OK的，现在不行了，也有可能氘灯能量不够了。
微A：线性范围是什么？
微B：线性相关系数，不同浓度和峰面积或其他检测结果之间的相关性。
微A：应该是说响应值和浓度（质量）在一定范围内成比例（正比）
微B：紫外是正比，ELSD就不是直线了。
5：流动相里面有絮状物，然后没看到，现在柱子压力很高，有办法冲回来吗——药物分析-张旭
微A：求助：流动相里面有絮状物，然后没看到，现在柱子压力很高，有办法冲回来吗？现在在用5％的硝酸冲。
微B：啥柱子？c18的话，硝酸上去已经不行了，5%硝酸你想怎么？最牛的色谱柱也就ph1。
微A：这个柱子用的是缓冲液，是不是盐析出了？
微B：盐析出来的可能性最大，常用缓冲液的，尽量不要纯有机相保存柱子。
微A：泵正常，但是用大比例水冲了一天了，都降不下来，C18柱子不能用硝酸冲吗？
微B：把系统里面的硝酸洗洗，柱子可以埋葬了，
微C：絮状物是菌，都不用做样，用不好，那就一天就完，比如盐析出，比如碱溶液，比如絮状物，比如上面所述，硝酸，碱性会导致硅胶溶解，酸性会导致键合相脱落，耐压不超过3000psi，一般柱子的PH使用单位2-9，如果要用宽PH，请使用聚合物反相柱。
微A：那么如果说流动相里面有絮状物造成的机械性堵塞的话，其实冲洗效果也不会太大？
微C：柱子已坏，絮状物一般就是细菌的菌体，不用冲了，这个不是冲可以解决的，分子量很大，你要把他降解成小分子才能过柱。可能是细菌进了柱子，直接高压把柱头的硅胶挤爆了，破碎的硅胶又把柱头堵上加堵。
微B：一般过滤白头就搞定了，细菌我还没见过堵这么厉害的，到柱筛板的几率不高，这种情况就是低流速冲个一晚上拼人品，人品到了啥都有了。
6：新c18柱刚用时分离度低于1.5，连续用了几天，一直做这个样品，分离度又满足要求了，是什么原因呢 —— 东莞太力-质检
微A：新c18柱刚用时分离度低于1.5，连续用了几天，一直做这个样品，分离度又满足要求了，是什么原因呢，新柱子需要活化？
微B：C18是一条长长的碳链，需要展开手臂才能拥抱更多的化合物，如果都是趴在地上，无精打采的，那就没力气去拥抱了。新柱子要至少20倍柱体积的流动相来活化。
7：HPLC只有一个峰，方法开发时对于出峰时间的控制有没有要求呢—— 东莞太力-质检
微A：我的意思是方法开发测苯甲酸钠25乙腈跑，结果出峰时间为6.5min，峰宽50s，对称因子1.05，用30乙腈跑，出峰时间提前至4.6min，峰宽变小为40s，而对称因子1.08，根据结果两种流动相选择上有什么判断标准啊，像这种简单的是不是一般控制跑10min就好了？

微B：对于反相色谱分析法，有机溶剂每增加1%保留时间缩短5%～15%，最常见的是10%，对称因子1.05是可以的，一般拖尾因子0.95~1.05

对称因子是10%峰高处前半峰与后半峰宽度的比值，拖尾因子是5%峰高处前半峰宽度与后半峰宽度的和与二倍前半峰宽度的比值。
微C：更全面的讨论
【原创】欺骗你的系统适应性参数之二——拖尾因子
链接：http://m.instrument.com.cn/bbs/d-3040973.html?from=groupmessage&isappinstalled=0

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夏天的雪

第1楼2016/04/10

应助达人

正相反相切换时流动相的过渡是必须的，长时间用正相最好更换一下密封圈，脱气机的问题不是很清楚，如果waters用正相要换配件岂不是非常麻烦的事情！！液相用水最好是超纯水，如果达不到要求短时间用用也没有多大问题的。稀释不成比例可操作过程和仪器及方法都有关系的，操作不当，仪器进样不对，色谱分离不好等都会造成不成线性不好；流动相里絮状物引起的柱压升高，如果是积累在筛板或者在线过滤器，预柱上通过清洗或许能够将压力降下来，如果积累在色谱柱中就不一定了；分离度变化不仅仅和色谱柱有关，与流动相也有一定的关系，如果流动相中用酸碱调过pH可能会有个平衡过程或者pH微小的差异引起的分离度的变化；方法开发中对称因子或者分离度有一定要求，这些与出峰时间会有一些关联，出峰时间当然是越早越好，节约做样时间，流动相，通常出峰较前的峰其峰宽、塔板数也高