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微聊ABC 经典小荟萃——0402

  • 一片枫叶
    2016/04/09
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 1:反相系统换正相流动相需要注意什么——安捷伦液相-涛
    微A:反相系统换正相流动相需要注意什么?我把保护柱换正相的,我记得反相和正相的密封垫也不一样。
    微B:确认你泵头的柱塞杆密封圈是peek的还是石墨的,如果是peek的需要更换成石墨的,peek不耐二氯甲烷,并做加压磨合处理。
    微C:正己烷和乙腈、甲醇不互溶;异丙醇和正己烷、甲醇、乙腈均互溶。切换的时候注意不溶的两种溶剂不能相互冲洗。必须用异丙醇过度,异丙醇的粘性较大,使用时应注意压力,调整流速。
    微D:正相系统和反相系统其实根本的原因是水,因为硅胶遇水会失活,所以主要是考虑替代水相的。因此在转换时,常用异丙醇过度,原因是异丙醇极性适中,正反相都合适。
    一般液相都是反相体系的,因此材质上考虑的都是反相体系常用材质,所以正相溶剂对其仪器可能会造成影响甚至损坏,更换前一定要仔细厂家其仪器是否适用于正相系统。例如:氟橡胶,一般泵头都有密封,常用的密封材料为氟橡胶;氟橡胶不耐丙酮和乙酸乙酯等,使用会导致其氟橡胶变性,没有弹性,材料变脆不耐磨。
    微E:注意你的脱气机,一般脱气机只适用于反相,要问工程师,我知道岛津的和沃特世的就不能用正相,除非换脱气机配件。
    2:想问下液相的用水,超纯水,电导率大于十八,我想问如果达不到这个要求,那么会对柱子产生具体什么影响——Donna
    微A:想问下液相的用水,超纯水,电阻率大于十八,我想问如果达不到这个要求,那么会对柱子产生具体什么影响?
    微B:超纯水:既将水中的导电介质几乎完全去除,又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大于18MΩ*cm,或接近18.3MΩ*cm极限值。
    微A:因为有时候超纯水机接的水的电导率达不到18,最近发现使用的C18柱子刚用不久峰型对称不好,PH值也在柱子的使用范围,连续坏了好几根柱子,是水中的什么离子影响了什么?
    微C:你超纯水机的交换柱脏了,应该换掉。
    微A:那这个不达标的水里是怎么影响这个柱子分离de,是氯离子/金属离子或者什么东西高了影响了哒?流动相为一酸胺水溶液/甲醇,我们是检测机构 ,方法是没有问题的。
    微D:氯离子容易腐蚀不锈钢管路。重金属离子能跟一些组分发生络合反应导致拖尾,重金属离子到硅胶柱里很难去除的,会影响硅胶基的均相结构,尤其是高价阳离子。
    3:C18色谱柱检测是最大分子量——化工检测-丫头
    微A:听说c18 最高做的分子量大概就2000。
    微B:不一定,首先跟孔径有关,60A的可能也就到2000,100A的估计5000左右,另外,还跟聚合物的空间构象有关。
    4:液相测有关物质、自身稀释一百倍不成比例、是正常还是不是正常——技术-昆明-洛桑
    微A:液相测有关物质、自身稀释一百倍不成比例、是正常还是不是正常?
    微B:线性范围没有覆盖呗,理论上正常,但是对于一个方法来说不正常。
    微A:因为我的东西比较纯、所以不清楚到底有什么影响?
    微B:线性范围做过没,如果以前做过OK的,现在不行了,也有可能氘灯能量不够了。
    微A:线性范围是什么?
    微B:线性相关系数,不同浓度和峰面积或其他检测结果之间的相关性。
    微A:应该是说响应值和浓度(质量)在一定范围内成比例(正比)
    微B:紫外是正比,ELSD就不是直线了。
    5:流动相里面有絮状物,然后没看到,现在柱子压力很高,有办法冲回来吗——药物分析-张旭
    微A:求助:流动相里面有絮状物,然后没看到,现在柱子压力很高,有办法冲回来吗?现在在用5%的硝酸冲。
    微B:啥柱子?c18的话,硝酸上去已经不行了,5%硝酸你想怎么?最牛的色谱柱也就ph1。
    微A:这个柱子用的是缓冲液,是不是盐析出了?
    微B:盐析出来的可能性最大,常用缓冲液的,尽量不要纯有机相保存柱子。
    微A:泵正常,但是用大比例水冲了一天了,都降不下来,C18柱子不能用硝酸冲吗?
    微B:把系统里面的硝酸洗洗,柱子可以埋葬了,
    微C:絮状物是菌,都不用做样,用不好,那就一天就完,比如盐析出,比如碱溶液,比如絮状物,比如上面所述,硝酸,碱性会导致硅胶溶解,酸性会导致键合相脱落,耐压不超过3000psi,一般柱子的PH使用单位2-9,如果要用宽PH,请使用聚合物反相柱。
    微A:那么如果说流动相里面有絮状物造成的机械性堵塞的话,其实冲洗效果也不会太大?
    微C:柱子已坏,絮状物一般就是细菌的菌体,不用冲了,这个不是冲可以解决的,分子量很大,你要把他降解成小分子才能过柱。可能是细菌进了柱子,直接高压把柱头的硅胶挤爆了,破碎的硅胶又把柱头堵上加堵。
    微B:一般过滤白头就搞定了,细菌我还没见过堵这么厉害的,到柱筛板的几率不高,这种情况就是低流速冲个一晚上拼人品,人品到了啥都有了。
    6:新c18柱刚用时分离度低于1.5,连续用了几天,一直做这个样品,分离度又满足要求了,是什么原因呢 —— 东莞太力-质检
    微A:新c18柱刚用时分离度低于1.5,连续用了几天,一直做这个样品,分离度又满足要求了,是什么原因呢,新柱子需要活化?
    微B:C18是一条长长的碳链,需要展开手臂才能拥抱更多的化合物,如果都是趴在地上,无精打采的,那就没力气去拥抱了。新柱子要至少20倍柱体积的流动相来活化。
    7:HPLC只有一个峰,方法开发时对于出峰时间的控制有没有要求呢—— 东莞太力-质检
    微A:我的意思是方法开发测苯甲酸钠25乙腈跑,结果出峰时间为6.5min,峰宽50s,对称因子1.05,用30乙腈跑,出峰时间提前至4.6min,峰宽变小为40s,而对称因子1.08,根据结果两种流动相选择上有什么判断标准啊,像这种简单的是不是一般控制跑10min就好了?

    微B:对于反相色谱分析法,有机溶剂每增加1%保留时间缩短5%~15%,最常见的是10%,对称因子1.05是可以的,一般拖尾因子0.95~1.05

    对称因子是10%峰高处前半峰与后半峰宽度的比值,拖尾因子是5%峰高处前半峰宽度与后半峰宽度的和与二倍前半峰宽度的比值。
    微C:更全面的讨论
    【原创】欺骗你的系统适应性参数之二——拖尾因子
    链接:http://m.instrument.com.cn/bbs/d-3040973.html?from=groupmessage&isappinstalled=0
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  • 夏天的雪

    第1楼2016/04/10

    应助达人

    正相反相切换时流动相的过渡是必须的,长时间用正相最好更换一下密封圈,脱气机的问题不是很清楚,如果waters用正相要换配件岂不是非常麻烦的事情!!液相用水最好是超纯水,如果达不到要求短时间用用也没有多大问题的。稀释不成比例可操作过程和仪器及方法都有关系的,操作不当,仪器进样不对,色谱分离不好等都会造成不成线性不好;流动相里絮状物引起的柱压升高,如果是积累在筛板或者在线过滤器,预柱上通过清洗或许能够将压力降下来,如果积累在色谱柱中就不一定了;分离度变化不仅仅和色谱柱有关,与流动相也有一定的关系,如果流动相中用酸碱调过pH可能会有个平衡过程或者pH微小的差异引起的分离度的变化;方法开发中对称因子或者分离度有一定要求,这些与出峰时间会有一些关联,出峰时间当然是越早越好,节约做样时间,流动相,通常出峰较前的峰其峰宽、塔板数也高

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