明堂
第11楼2016/07/26
为什么流动相甲醇只有3%?为什么要用庚烷磺酸钠?
回答,因为检测的样品是碱性,为了增加保留,所以选择了庚烷磺酸钠,但是保留的还不太理想或是多个碱性样品分离度不够,所以只能降低甲醇的比例!这就是这个方法建立的原因!损伤柱子主要是庚烷磺酸钠造成的,二是水的比例太高!
如果要继续采用这个方法,我的建议是用最便宜的C18柱,比如国产C18柱,因为分离效果主要来自于磺酸根,用再好的C18柱效果也不会太好! 并且最好选择碳载量大一些的!这样可以提高庚烷磺酸钠的与C18结合的牢固性!(你的流动相为什么过夜平衡,也是同样的目的)
比如国产的Kromasil,一千多一根即可!
我的建议是提高这个方法,一看到庚烷磺酸钠就知道是上世纪80-90年代时开发的方法了!目前有更多的新式色谱柱可以解决你这个问题!
1、选择宽pH C18柱,
在pH9-11左右来分析你的样品,流动相例如:乙腈 碳酸氢铵水溶液 pH10
比如Xbridge RP18, ACE SUPER C18, ECOSIL EXTEND C18, Gemini C18,Triart C18等等,性价比推荐ACE
2、用极性嵌入的C18柱,
纯水相,不加离子对和缓冲盐(我担心保留和分离度还是不够,但好处就是可以继续用你的色谱柱)
比如Symmetry shield RP18, ECOSIL EPS-C18, ACE C18-Amide, Alltima HP C18-EPS, Discovery RP-Amide C16 等等,性价比推荐EPS-C18以及Symetry
3、用HILIC来做,
乙腈和10-50mM醋酸铵水溶液,与C18出峰顺序会颠倒,填料改变太多,对实验人员的开发方法的能力要求比较高!
比如Atlantis HILIC,Merck Zic HILIC,Inertsil HILIC,Cosmosil HILIC等等,性能推荐Merck和价格推荐GL