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话说移液器

长胡子的菩提

2016/05/31

私聊

常用设备综合讨论

各位前辈好，老赵头又来了！老赵头今天要跟大家聊聊移液器。
我们化工狗的贫穷你们是想不到的，平时都是移液管、量筒的干活，生物领域向来都是用高大上的移液器、瓶口分液器，比比档次差太多了，让我们汗颜呀。此处插播八卦：看看这位用滴管的冰块脸法医，话说这孩子用滴管转移溶液过程中滴了一路，剧组就不能找个密封性好点的滴管呀，唐唐法租界巡捕房法医用这样的淘宝专供，剧组差钱的节奏么？看看小弟废了九牛二虎之力才截出来的图。

再深度八卦一下此法医为最近超火的太子妃的前男友奥。

言归正常我们话说移液器。
首先我们看下移液器的外观和功能，以色魔（Thermo）F1手动可变量程移液器为例，见下图，忽略我拍照技术不咋滴吧，其实真正原因是缺单反。

看完了外观和各按钮的功能，我们再看下移液器的原理
按工作原理分类：
1、气体活塞式移液器
2、外置活塞式移液器
So问题来了，气体活塞式移液器的原理是什么呢？咱们看图说话

气体活塞式

活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和排液。
加样体积范围：1μL-10mL
缺点：不适宜移取高粘度、易挥发的液体、易发生交缠污染
我们再看下外置活塞移液器的图解

外置活塞式

外置活塞式移液器，活塞在吸头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没有空气段。
适用于粘度比较大和易挥发的液体操作。
无空气间隔，避免了样品与空气接触可能发生的气雾交叉污染，因此非常适合珍贵的试剂和生物样品的移取。
移液器的使用方法
一个完整的移液循环：
1、吸头安装
2、体积设定
3、预洗吸头
4、吸液
5、排液
6、退却吸头
吸头安装：
（1）对于摩擦密封的吸头，正确的安装方法，旋转安装，具体操作是把移液器顶端插入吸头，在轻轻用力下压的同时，左右微微转动，上紧即可，切记不能用力过猛，更不能采取剁吸头的方法进行安装，这样会导致移液器内部配件因撞击产生瞬时撞击力而变得松散，甚至对导致调节旋钮卡住，严重情况下可能会折断套筒。
（2）对于连锁卡点密封的吸头，安装比较简单，只需对准吸头轻轻按压下即可完成安装。

体积设定
（1）粗调：通过旋钮将体积快速调至接近预想值
（2）细跳：当体积接近自己的预想值之后，应将移液器横置，水平放置，通过调节旋钮慢慢的将数值调至所需体积，避免视觉误差造成的影响。
（3）从大体积调至小体积时，正常调节，调至所需数值即可。
（4）从小体积调至大体积时，需要先调节超过设定体积的刻度，再回调至设定体积，可保证最佳的精确度。
（5）在安装完吸头和设定好体积之后，应按几次活塞，空排一下，为了使弹簧形伸缩更自由并且排出密封组件间的空气。
预洗吸头
我们安装了新的吸头或者增加了移取的体积以后，应该用要移取的液体润洗2-3次，以便让吸头内形成同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有更高的重现性。
吸液和排液
正向吸液：先将移液器排放按钮按至第一液程，将吸头垂直浸入液面，慢慢释放按钮（防止液体倒吸进入枪身腐蚀内部结构）。浸入深度为液面下2-3mm。浸入过深的话，液压会对吸液精度产生一定的影响。排液时，吸头贴壁，先将排液按钮按至第一液程，略停顿后，再按至第二液程，这样可以保证吸头内无残留液体。注意：对于10μL以下的移液体积，应快速按下两个液程，以保证液体彻底排出。
反向吸液：吸液时将按钮按到第二液程再慢慢释放，这样会多吸入一些液体，排出液体时只要按到第一液程即可，多吸入的液体可以补偿吸头内部的表面吸附，移液完成后弃去吸头内多余液体即可，该方法适用于同体积多次移液。反向吸液一般与润湿方式结合使用，适用于粘稠液体，和易挥发液体。
卸吸头
轻按吸头推杆，卸去吸头，将量程调至最大值，使弹簧处于伸展状态，将移液器悬挂于支架上
使用注意事项及维护
1、移液器是否漏液
将吸取液体后的移液器垂直静止10秒，观察是否有液滴缓慢的流出。若有则说明密封不严。
原因：
（1）、吸头不匹配
（2）、吸头没上紧
（3）移液器内部气密性不好
处理措施：
（1）、使用原装吸头
（2）、重新安装吸头
（3）、拆开移液器在活塞和O型圈接触紧密的地方涂些硅油。弹簧不要擦硅油，出厂时已经擦过，一般不需要处理，如擦拭了过多的硅油会影响弹簧的伸缩运动。

另外小弟在这里提醒大家小量程的移液器还是不要拆的好，内部结构太复杂，密封圈太小丢了不好找，本来凑合能用的经我们处理之后彻底报废可不太好，虽然小弟经常干这种事。

更不要拆成下图这样，真的装不回去了！！！

2、不可用大量程的移液器移取小体积的液体
3、在设置量程时，所设体积应在移液器量程范围内不要将旋钮旋出量程，否则会造成机械装置卡住，齿轮损伤，损坏移液器。
4、吸液速度应缓慢，速度太快容易造成液体反冲和产生气泡，导致移液体积不准，并造成移液器损坏。
5、定期清洁移液器，用酒精棉擦拭即可，当密封不好或者倒吸时需要拆开擦拭内部，清洁完活塞和内部组件，然后在活塞和O型圈上用棉签、毛刷或无尘布轻轻涂一层硅油。
说完了怎么用以及注意事项，小弟再来说说校准的那些事儿
什么时候需要校准：
1、常规使用每半年校准一次
2、倒吸、拆装之后需要校准
3、维修之后要校
4、感觉移液器不准的时候，也需要校准
下面看下小弟这支移液器出厂的校准报告都有啥内容，咱们还是看图说话

到这里顺便说一下，咱们拿来校准移液器的天平首先要保证是没问题的奥，天平室的操作条件满足要求、天平是经过计量检定并校准的。那么我们来看下这个例子，我不是故意找事儿的奥。

以天平界老大梅特勒新出的XPE204为例，官网列出了最小称量值（USP）为82.0mg。也就是说称量小于82.0mg以下的质量都是不能满足USP要求的。

我们再降低点标准按照

来算一下，这台天平的最小称量值。

Max=220g d=0.0001g 这是MT官网给出的数据，按照上表我们可以算出此万分之一的天平最小称量值为100e=100mg，为方便计算我们姑且把水的密度当做1mg/uL。也就是我们至少要量取大于100ul的水，此时的称量值才是可信的。这也是为什么在校准报告中校准20uL使用的天平室十万分之一的，而不是万分之一的。

这是小弟在百度文库看到的某疾控中心移液器的校准SOP，称量几毫克用万分之一的天平，移液器是校准还是校不准？
我不是找茬的，无意中看到而已。
言归正传，说校准。工欲善其事必先利器，条件，工具，都准备好了，那么我们就开始吧。
色魔手动移液器的工具是长这样子滴

说明书里有详细的校准操作步骤，顺时针旋转增大容量，逆时针旋转减小容量。先校准体积小的那一点，再校准体积大的那一点。若数值小的一点校准通过，在校准数值大的那一点过程中又调整了螺母还需再次校准体积小的那一点。手动多道移液器的校准比手动单道移液器校准多了两步，第一步是吸液后观察所有通道是否在一水平面，如果在同一水平面那么开始校准，如果不在同一水平面，排除吸头安装问题后，我们就要开拆了。

调节完组装回去后，再次实验吸液时各通道液面是否在同一平面，假定我们修好了，就可以校准了，对于多通道的移液器，我们可以校准两侧的两个通道即可。据说工厂里有一台价值上百万的天平，一次可以做出多个通道的数值，跟普通天平不一样，那台天平是有多个传感器的，好神奇，真想去看看庐山真面。
电动移液器的校准比较方面了，在机器里面有校准菜单，只需输入真实称量值即可。
以上关于移液器部分的内容均是这位有20年移液器维修经验的冯工所赐，非常感谢冯工两天的授课。

分
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