求助：本人做的药材提取物，用waters ESI UPLC-MS液质联用，样品离子流图如下，怎么继续改条件呢？

石矶

2016/06/04

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液质联用（LCMS）

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样品是中药提取物，浓度为35mg/ml,稀释多少倍合适呢
还有对照品用甲醇溶解可以吗,流动相是乙腈和0.1甲酸水，对照品浓度为0.2ml，应该稀释多少倍啊，我稀释了1000倍，对照品没有一个我要的主峰，全是其他不相关的小峰。

sun-shadow 2016/06/05

问题1：你木有说你的目标物是什么，所以很难直接给你一个参考色谱条件。更重要的是，水提物，极性过大，非常难做，因为普通C18反相色谱柱上木有保留。建议用HILIC柱子试试。你有标准品，铁定是已知物了，可以查文献参考别人的色谱条件。如果你不太熟悉[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的话，建议多查查文献。直接用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]做色谱条件优化有点浪费，话说你实验室很有实力啊，而且UPLC对样品净化的要求高，你要仔细过滤。千万别把机器给堵了。你有UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]，所以定性时，不止可以用保留时间定性，更准确的是你可以根据目标物质核比，也就是它的质谱信息做定性，比保留时间更准确~~~ 问题2：中药水提物，我估计90%概率含多糖含量很高，你要结合很多方法来纯化，普通市售C18-SPE小柱是不行的~因为木有保留~你可能需要使用，离子交换，大孔树脂，凝胶等多种手段~

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sun-shadow

第1楼2016/06/05

本人上学时，做过一段天然产物化学，希望我的经验对你有帮助。
看你帖子的意思，是想要通过与对照品（标样）做对比，在中药提取物中找到与对照品相同的目标物。现在你找不到，所以你怀疑是你的稀释浓度不对。
首先，你先要确保你的对照品出峰良好，确保你分析的液相条件正确，你并没有在帖子里贴出。
然后，保证有正确的色谱条件后，你要在样品离子图中，相同保留时间附近，寻找你的目标物，这时，因为是成分非常复杂的中药粗提物，你从TIC图上找，很难找到。你需要提取你目标物的离子。在提取离子图里找，这样可以发挥[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质超强的去本底能力。
然后，如果找到了，算你运气好，如果没找到，正常。
我不太清楚你的扫描模式，如果你的目标物比较少，建议你直接整个MRM，去本底能力最强，找到的可能性最大，你图太小我看不太清你的扫描模式。
如果还找不到，与其怀疑你的浓度上的不对，还不如怀疑你的粗提物中有东西将你的目标物遮挡。此时，一味增大浓度显然不可取。过大的浓度破坏峰型，损伤仪器，然后，很有可能你还是找不到。虽然你上了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质，但[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质也不是万能。
我的建议：
1，如果你的粗提物量比较大，请耐心使用层析方法，分离纯化一下，因为你有目标物，可以根据目标物的化学性质，有目的的纯化，哪怕是简单的萃取呢。
2，如果你并不确定粗提物里有没有目标物，而只是作为快速大通量初筛。那难度要大点了。显然，你的目标木在粗提物中是少量甚至痕量，即便是初筛，看你总离子流图，杂质还是太多，还是有目的的萃取一下，再上质谱。重点是去掉多糖，去掉大量成分。针对少量成分，在筛查。用MRM筛吧。

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石矶

第2楼2016/06/05

谢谢你，你的回答对我很有帮助，我做的是中药水提物，想通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质联用分析其中的成分，然后通过对照品的保留时间确认这个成分，现在主要有两个问题，（1）我不知道怎么优化液相条件，现在我的液相条件对照品出峰都不行，根本找不到要的那个主峰，（暂时我还没拷下图片来）；而且总离子流图出峰也不好；（2）我想问下一,粗提物可以先用C18小柱纯化一下吗
sun-shadow(sun-shadow) 发表:本人上学时，做过一段天然产物化学，希望我的经验对你有帮助。
看你帖子的意思，是想要通过与对照品（标样）做对比，在中药提取物中找到与对照品相同的目标物。现在你找不到，所以你怀疑是你的稀释浓度不对。
首先，你先要确保你的对照品出峰良好，确保你分析的液相条件正确，你并没有在帖子里贴出。
然后，保证有正确的色谱条件后，你要在样品离子图中，相同保留时间附近，寻找你的目标物，这时，因为是成分非常复杂的中药粗提物，你从TIC图上找，很难找到。你需要提取你目标物的离子。在提取离子图里找，这样可以发挥[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质超强的去本底能力。
然后，如果找到了，算你运气好，如果没找到，正常。
我不太清楚你的扫描模式，如果你的目标物比较少，建议你直接整个MRM，去本底能力最强，找到的可能性最大，你图太小我看不太清你的扫描模式。
如果还找不到，与其怀疑你的浓度上的不对，还不如怀疑你的粗提物中有东西将你的目标物遮挡。此时，一味增大浓度显然不可取。过大的浓度破坏峰型，损伤仪器，然后，很有可能你还是找不到。虽然你上了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质，但[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质也不是万能。
我的建议：
1，如果你的粗提物量比较大，请耐心使用层析方法，分离纯化一下，因为你有目标物，可以根据目标物的化学性质，有目的的纯化，哪怕是简单的萃取呢。
2，如果你并不确定粗提物里有没有目标物，而只是作为快速大通量初筛。那难度要大点了。显然，你的目标木在粗提物中是少量甚至痕量，即便是初筛，看你总离子流图，杂质还是太多，还是有目的的萃取一下，再上质谱。重点是去掉多糖，去掉大量成分。针对少量成分，在筛查。用MRM筛吧。

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sun-shadow

第3楼2016/06/05

问题1：你木有说你的目标物是什么，所以很难直接给你一个参考色谱条件。更重要的是，水提物，极性过大，非常难做，因为普通C18反相色谱柱上木有保留。建议用HILIC柱子试试。
你有标准品，铁定是已知物了，可以查文献参考别人的色谱条件。如果你不太熟悉液相的话，建议多查查文献。直接用UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS做色谱条件优化有点浪费，话说你实验室很有实力啊，而且UPLC对样品净化的要求高，你要仔细过滤。千万别把机器给堵了。
你有UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS，所以定性时，不止可以用保留时间定性，更准确的是你可以根据目标物质核比，也就是它的质谱信息做定性，比保留时间更准确~~~
问题2：中药水提物，我估计90%概率含多糖含量很高，你要结合很多方法来纯化，普通市售C18-SPE小柱是不行的~因为木有保留~你可能需要使用，离子交换，大孔树脂，凝胶等多种手段~