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庐山面目真像大白——0701

一片枫叶

2016/07/07

液相色谱（LC）

1：数据完整性如何做的——管理权限
答：1：每台电脑都要设置登录权限，实验软件要开审计追踪，没有审计追踪的，每次图谱的处理积分方式什么的都要在仪器使用记录上写清楚。
2：软件审计追踪，要设置用户.密码。以示只有你可以登录到该软件进行实验或者数据处理。
3：比如不能改时间，你做个改时间的操作，会提示要求管理员权限，改时区就提示不允许，然后你把这过程截屏
4：电子数据，每半年归档保存一次，存放在移动硬盘里，然后交给QA，做好电子数据归档的记录。
2：峰比正常情况下提前是什么原因——蓝色的是反常的，黑色的是正常的
我把两个通道露出空气外面，以2ml/min的流速purge两通道, 发现a通道比B通道气泡走的快一倍了。已经排除了操作、方法设置等原因…

答：结论：峰提前的问题已经解决，是其中一个通道滤头损坏导致吸液较慢，从而使整个序列的流动相比例发生改变，致使峰提前。另外，网友有提到，比例阀故障也会引起此现象。检查故障时，确认比例阀无误，更换新的滤头，图谱恢复正常。
3：峰分叉的原因——甲醇➕乙酸铵(5%+95%)，

答：推测：1：会不会一些成分没有洗脱下来，一直进样导致柱效降低——新色谱柱
2：溶剂选择不对——之前走样品正常
3：样品没有过膜或进样过载——样品已过滤减少进样量没有效果。
4：柱子接头不好有死体积——峰型不好或分叉
5：可能是由于样品在流动相中的溶解性差，样品在色谱柱头沉积致使柱头污染，造成柱压升高和峰分叉。
结论：刚才把保护柱芯拆掉了，没有分叉——保护柱污染
为了急于分享，系统没有走稳就进样了，图中出现了基线不稳和压力波动的现象，但分叉的问题解决了。

4：仪器：watersUPLC-ELSD-TUV。检测物：黄酮类化合物。
这三个图分别为进样3uL,4ul,5ul的图，是不是峰与周围的没分开，第一和第二的大峰随进样量加大出现这种情况会有可能是什么原因？

答：推测：1：只从图谱看是进样量的问题了。
2：前一针遗留杂质也不定，你得连续进三针，然后间隔若干分钟后再进样，才能确定是不是杂质了。
结论：进样量过大——又进了个2微升的感觉峰形还可以。
5：我的样品浓度是1mg/ml进10ul，主峰是900，我稀释1000倍，那么现在相当于0.1%的水平的主峰，S/N=10，这个水平的定量限，是不是高了一点，常规应该是0.05%吧？
答：实验：1：稀释1000倍，即进样浓度0.1%水平的s/n=13
2：推测：稀释到0.05%水平的话，s/n=6.6。如果进样15ul的话，s/n应该能达标到10。但是按15的进样量的话，100%水平的浓度，主峰会大概到1400，问题就在这里，超过1000。waters的峰纯度鉴别不超过1000才准，所以有点冲突。
结论：要根据组份含量不同。安全指标，有限量和检出限。营养指标要测定准确，在标曲范围内
6：单标走出来这个样子，什么情况？

样品基质复杂，待测物出峰处有很多干扰物质，没法定量，走纯溶剂，什么都没有，以前走的很干净的，现在单标不应该走成这样。
答：推测：1：储备液储存太长发生了变化——杂质都是那么一致，所以我觉得不是仪器的原因，而且峰型也很好，这种情况下，我认为是标样原因。
2：还有就是改变样品的处理方法，或者使用质谱——待测物在杂质里面，根本找不出来，不像气质可以提取离子或用SIM模式。
结论：问题还没有彻底解决，我用原来的方法进了一针纯甲醇，发现正好在我出峰的位置有个杂质峰，我以为是溶剂污染了，重新打开一瓶色谱级甲醇，问题依旧。然后把方法改了，目标峰和杂质峰分开了，但是峰形不太好，有些拖尾。然后进样品，样品杂质很多，目标峰依然混在杂质中，无法定量。不知道进纯溶剂为什么会有杂质峰，以前是没有的。难道柱子被污染了？最后我用气质定量的。
7：请问用完缓冲盐之后清洗程序怎么设置，为什么我设置梯度结果系统不按梯度走，安捷伦1260手动进样器，打到充样位置，纳闷呢，今天早上过来看，就是按梯度的第一个比例和流速在运行。

答：1：方法命名有没有仪器不识别的字符，方法运行结束后仪器是standby 还是shut down——当时是直接在仪器设置里面设置了方法，然后另存为，然后就直接搬动进样器让他运行设置的程序。要确保冲洗方法正常运行，还有一个shut down的程序，这个要设置正确。
2：第一个梯度时间60分钟，你想啊，样品采集时间是有限的吧，梯度时间超过了样品采集时间，以后的时间怎么会执行梯度设置呢——采集时间应等于梯度最终时间。
3：没有单独调用设置里的这个方法。第一个程序是你的样品方法程序吗，进最后一针的时候有没有确保冲洗方法正常开始运行呢——以后一定要确保冲洗方法正常运行了才离开，还有一个shut down的程序，这个要设置正确。
8：安捷伦液相，灯能量合格，基线波动还是很大，流动相：正己烷，压力稳定，没有接柱子。

推测：1：流动相：正己烷，刚换水，没有接柱子，压力低——由正相色谱流动相向反相色谱流动相必须有中间过渡溶剂（比如：异丙醇），没有接柱子自然压力低。
2：灯设置是开着的，流通池内有气泡。
结论：流通池的问题。
9：出现前肩峰——不是柱子，同样的样品，第一针会第二针不会，第三针可能又会，第四针第五针又好了。

说明：因为前几天调针位置时候出现高度没调好，微漏，歇了一晚上，第二天重新调，调整好了，不漏了，但是我色谱图出现了这样的问题，后来连续进了十针，看看精密度，结果前四针出现类似情况，第五针之后就好了.rsd很差，接的质谱，sim模式的峰面积，偏差太大了有几倍的关系。
推测：1：怀疑依然是针位置没调好，针也有一点点弯了感觉。
2：针座密封圈不密封对色谱图会产生影响——漏液样品走丢，对峰响应有影响。
结论：峰分叉的问题：工程师建议把autosample 里needle stroke 进样针冲程由52改成54，后来继续走就没问题了，仪器精密度还没跑，还不确定是不是改之后会解决这个问题，还没做对比。
10：最近哪台uplc每天早上开机后会自己断电重启，量了电源电压，稳定时是24v，断电重启电压就低很多，是不是供电电源坏了，有没有遇到过的
推测：1：是主机重启还是检测器重启——高压电源问题。
11：液相色谱中洗针的工作原理
答： 1：自动进样器型号不一样，方式不同——岛津和安捷伦的自动进样器是有个小瓶，针到瓶子里沾一下，清洗外壁，赛默飞的自动进样器有单独的外壁清洗液，有个蠕动泵。液相R通道洗，也有可以流动相洗的设置，赛默飞的是D通道。
2：洗针功能可以把样品残留降低到最低限度，这里的洗针—仅仅是洗针的外侧，即将其在某瓶溶剂中蘸一下而已，针的内壁不需要清洗，应在瓶中盛放能溶解样品的溶剂。针内也有清洗的，洗针时选择inject模式。
3：安捷伦高性能自动进样器——有一个带有蠕动泵清洗孔能够清洗针的外壁，对非常敏感的样品分析来说，这可以减少已经很小的交叉污染，应用洗针的溶剂瓶可放在溶剂柜上，洗针产生的废液通过一个废液管排放。
12：岛津LC－20A检测器被禁用，怎么办？

推测：1：查看信号线——网线接头没有松动，而且可以走基线，现在也不能控制自动进样器进样了。
2：没配置进去咋控制自动进样器——有基线并可以绘图。
3：模块故障——基线是检测器信号吧，自动进样器是独立模块，也有独立的信号，你尝试一下能否控制洗针的清洗动作。
4：如果可以控制清洗和调流量，唯独不能进样，再看看是否是卡槽复位问题。
5：更改了电脑IP，PDA就启用了，但是未连接状态。
结论：仪器神奇般的活过来了！方法是更改一下仪器配置中的自动进样器的状态，同步改运行，如下图……

至于PDA的禁用状态，对仪器使用没有影响～依旧如下图

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一片枫叶

第1楼2016/07/17

应助达人

顶一下。

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妮妮118

第2楼2017/08/22

非常好的帖子

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