高效液相色谱——液液分配色谱之：极极如意令

液液分配色谱篇——包治百变的“HPLC咒”:极极如意令 此“咒”一出必峰回路转

一、关于高效液相色谱的主要类型及选择

以液体作流动相的色谱称液相色谱。广义范围内，除柱色谱外，薄层色谱（液固色谱）和纸色谱（液液色谱）也属于液相色谱。该篇只讨论狭义的液相色谱，即柱色谱。柱色谱法按分离机理分类可分为液固吸附色谱、液液分配分色谱、键合相色谱、凝胶相色谱、离子色谱等。其中，离子色谱法的分析对象是离子性化合物。

本篇只论行业目前广泛使用的高效液相色谱：液液分配色谱。

二、关于高效液相色谱的核心与保护

在高效液相色谱分析中，除了固定相（色谱柱填料）对样品的分离起主要作用外，合适的流动相（也称为做洗脱液）对改善分离效果也会产生重要的辅助效应。

从实用角度考虑，选用作为流动相的溶剂除具有价廉、易购的特点外，还应满足高效液相色谱分析的下述要求：

1. 选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性；

2. 选用有溶剂应有高纯度，以防甩含微量杂质在柱中积累，引起柱效性能的改变；

3. 选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如使用UV检测器，就不能选用在检测波长下有UV吸收的溶剂；若使用RI检测器，就不能使用梯度洗脱；

4. 选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度；

5. 选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。使用低黏度溶剂，可减少溶质的传质阻力，有利于提高柱效；

6. 应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全；

附：一般实验室流动相备品的极性强度可用溶剂强度参数 ξ 表示。 ξ 是指每单位面积吸附剂表面的溶剂的吸附能力， ξ 越大表明其极性也越大。如下：

三、液液分配色谱的分离原理及与正、反相的异同

分离原理：在液液分配色谱中，一个液相作为流动相，另一个液相（即固定液：填料化合物）则分散在很细的惰性载体或硅胶上作为固定相。作为固定相的液相与流动相互不相溶，它们之间有一个界面。固定液对被分离组分按照它们各自分配系数，很快地在两相间达到分配平衡。这种分配平衡的总结果导致的各组分迁移速度产生不同，或快或慢，从而达到分离的效果。很明显，分配色谱法的基本原理与液液萃取相同的一致的，都是由化学性质的差异引起的分配定律。

正、反相的异同：依据固定相和流动相的相对极性的不同，分配色谱法可分为：正相分配色谱法——固定相的极性大于流动相的极性；反相分配色谱法——固定相的极性小于流动相的极性。

在正相分配色谱法中，固定载体涂布的是极性固定液（即填料化合物），流动相是非极性溶剂。可用来分离极性较强的水溶性样品，洗脱顺序即有：非极性组分先洗脱出来，极性组分后洗脱出来。

在反相分配色谱法中，固定相载体上涂布极性较弱或非极性的固定液（即填料化合物），而用极性较强的溶剂作流动相。可用来分离油溶性样品，其洗脱顺序与正相液液色谱相反，即极性组分先被洗脱，非极性组分后被洗脱。

四、正相、反相流动相的改性方法

在正相分配色谱中，使用的流动相此时以已烷、庚烷为主体，可加入﹤20%的极性改性剂，如1-氯丁烷、异丙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、乙腈等；

在反相分配色谱中，使用的流动相以水为主体，可加入一定量的改性剂，如二甲基亚砜、乙二醇、乙腈、甲醇、丙酮、对二氧六环、乙醇、四氢呋喃、异丙醇等。

注：改性的原由主要调节流动相的极性强度和改造其洗脱能力，但切勿改性过度导致造成色谱柱损伤！！！切记！切记！切记！

林林总总有诗曰：

选流动相溶剂：选溶先着稳，纯度定柱寿

选溶样品溶剂：溶器相匹配，多溶方灵敏

概括溶剂效果：毒低得安全，低黏得高效

柱子极性特征：相正而极强，相反而低极

正相分析特性：水溶选正相，强相而后现

反相分析特性：油溶必反相，强强多分离

正流动相要求：正相烷不二，极弱先出局

反流动相要求：反相与水多，改性防伤害