面积归一化法的准确性

应助达人

归一化法适用的一个条件就是所有组分都要对检测器有响应，对于DAD和VWD而言等量不同的组分在相同检测器条件下响应值差距还是很大的基本没有什么可比性，所以很同意楼主的“这种面积归一化的结论是相对的”。如果使用归一化法想要得到相对可靠的结果的话最好选择通用性更强的检测器和条件，比如使用示差折光或蒸发光散射等。

从这个例子可以看出国内很多单位对面积归一法的理解不到位，就像楼主说的样品过载问题。事实上，做的好的单位，对于样品浓度是有规定的，样品浓度是方法参数的一部分。

应助达人

归一化法结果准确的先决条件是：
1、所有组分都能出峰，举一个例子，含某纯物质的1%水溶液，进液相只一个很干净的峰，归一法给出的含量会是100%，但实际含量是1%，99%的水在液相上不出峰导致结果差异。
2、要求在相同条件上所有组分的响应因子要接近。例子：含50%A与50%B混合物，如果A响应因子是B的一倍，即相同浓度下A的峰面积是B的一倍，那归一化法的结果就是A含量是66.7%，而B就33.3%。明显与实际不符。这里就涉及不同波长对不同物质有不同的响应因子，就要去找到这个响应因子接近的波长来做归一化法的检测波长，而不是单独的增大主成分或杂质成分的响应。
3、关于标尺范围：只要在线性范围内的归一化法才有意义，液相峰面积仍然是符合朗伯比尔定律，即浓度高到一定程度后，曲线会向X轴弯曲，所以哪怕主峰不超标尺范围也有可能得到杂质比偏大的结果，如果主峰超标尺，那偏差就更大。这种情况一般可以通过自身对照的归一化法加以一定的克服。通用型检测器一般灵敏度较低，同时一样也会存在超线性的情况。
楼主在不同波长下联合峰纯度进行比较已经是液相在没有对照品时比较好的方法了，其它还可以通过使用不同的流动相（有些物质需要在特定的流动相下才会有响应）加以检测。归一化法一般的结论是纯度越高的越准确，纯度越低的越不准确。

楼主总结的很好，
柱效很重要
面积归一化法也只是无限接近真值而已，

应助达人

波长对峰面积影响还是很大的

应助达人

平时工作中很少有面积归一化法来测样品的含量

应助达人

平头峰直接来积分计算吗？不是要稀释后进样再进行积分吗？

是的，过载会影响积分准确性。

面积归一化法主要在哪些测试情况下用到？