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流动相中缓冲液的pH

dywzqbx

2016/10/20

液相色谱（LC）

流动相中如果有缓冲液，同志们会怎么调pH？
（1）eg直接配置pH 7.6的buffer然后和有机相混匀，即pH 7.6的buffer：MeOH（42：58）
（2）eg将buffer和有机相混匀然后调节pH，即buffer：MeOH（42：58）调pH至7.6
第（1）中，今儿配制的时候混完测了一下pH，结果居然达到了9.3，虽然一直感觉有有机相存在的时候pH会发生变化，但没想到会变到这么大（这样是不是也会影响色谱柱的寿命呢？），若有了解的人希望能解释一下其中变化的原因。
第（2）中，有多少人会使用第二种，感觉有机相存在会让pH的变化难以捉摸，所以会有点抵触，但现在看来，一不小心可能就会超过色谱柱的耐受pH了，各位小伙伴儿们怎么看？

分
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一片枫叶

第1楼2016/10/20

应助达人

比较倾向于第二种情况。

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有水有渝

第2楼2016/10/21

应助达人

我倾向于第一种，当然最终看方法说明，我倾向于第一种的原因是，基本上方法中色谱条件项下流动相的配制中，pH值仅标注在水相后，而不是标注在有机相后或特别说明是加入有机相后再调节pH值。

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夏天的雪

第3楼2016/10/22

应助达人

实验中通常使用第一种配制方法，虽然也和楼主一样测度pH值，发现两者的变化很大，但是实验中一般用的都是在线混合，采用第二种方法比较麻烦，而且容易出现试剂的浪费，另外和有水有渝老师的观点一致，通常标准中pH值一般标注在缓冲盐或者水相中，特别标注的除外

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dywzqbx

第4楼2016/10/23

应助达人

其实我之前一直倾向于第一种，只是有时候发现混合后的pH可能会超出色谱柱的耐受pH，有机相对于pH的影响原理及影响结果都是不确定，所以在临近色谱柱耐受pH的时候可能需要额外注意，尤其是在方法开发过程中更应该多加注意。
对于我们来说混合后比较实用于我现在所在的环境，两种混合方式各有优劣，只是看使用环境了，而且在USP中不乏这种预混合的方法。
夏天的雪(bingwang228) 发表:实验中通常使用第一种配制方法，虽然也和楼主一样测度pH值，发现两者的变化很大，但是实验中一般用的都是在线混合，采用第二种方法比较麻烦，而且容易出现试剂的浪费，另外和有水有渝老师的观点一致，通常标准中pH值一般标注在缓冲盐或者水相中，特别标注的除外

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dywzqbx

第5楼2016/10/23

应助达人

其实我之前一直倾向于第一种，只是有时候发现混合后的pH可能会超出色谱柱的耐受pH，有机相对于pH的影响原理及影响结果都是不确定，所以在临近色谱柱耐受pH的时候可能需要额外注意，尤其是在方法开发过程中更应该多加注意。
有水有渝(xky0230699) 发表:我倾向于第一种，当然最终看方法说明，我倾向于第一种的原因是，基本上方法中色谱条件项下流动相的配制中，pH值仅标注在水相后，而不是标注在有机相后或特别说明是加入有机相后再调节pH值。

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浪淘沙隐

第6楼2016/10/23

pH计测pH一般要求是水溶液，溶液中含有较多有机溶剂会不太准确。

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dywzqbx

第7楼2016/10/24

应助达人

pH的基础是离子浓度的计算，有有机溶剂必然会影响pH，只是有时候发现混合后的pH可能会超出色谱柱的耐受pH，所以觉得这个应该也列入考虑范围
浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:pH计测pH一般要求是水溶液，溶液中含有较多有机溶剂会不太准确。

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m3148964

第8楼2016/10/24

我也倾向于第一种，ph是针对水溶液而言的

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lijing320323

第9楼2016/10/25

按照标准操作，有的是要求先混和，再调节PH的
我很想知道为么混合后pH会变化那么大？

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浪淘沙隐

第10楼2016/10/26

既然加入了有机相后pH不是真实的pH，并且USP上有不少先混合后调pH的，还有更多的先调pH再混合的，就可以知道这样都不会对色谱柱有太大的损害。我觉得这时候不求甚解也是可以的。

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