高效液相色谱梯度洗脱

应助达人

您可以先设置等流速的条件测定，两个组份不一定要用梯度，如果要设置梯度可以依据等度条件再优化

你第二个物质，使用0.5ml/min的流速依然掩盖不了基本无保留的事实，其容量因子顶多为3。能不能用同一个方法检测，还需要看你检测的目的，如果是检测残留，那么可以试试，如果是检测纯度，那就肯定不行。

应助达人

同时测定，可以用梯度洗脱,如果原来使用相同的色谱柱。建议使用第二个条件作为初始流动相，在3分钟开始甲醇由5%变化至10分钟95%，然后保持至第二个组分流出。如果中间相差太多时间，可以同时把流速提高至1.2ml/min；个人观点，仅供参考

这两个样品极性相差太大了，要想在一个条件下检测，要考虑的方面很多，包括物质的pKa，结构式中的极性等，最麻烦的是第二个条件下，极性太大，出峰太快，基本无保留，这时候就要在流动相的pH值和柱子选择上多考虑了，而不是首先想到用梯度方法来分离。方法开发是比较复杂的，需要用到很多方面的知识，还有经验，一两句话说不清楚的。

方法开发一定要知道待测物结构，否则就是无头苍蝇。

设置一个大梯度先跑一针，看看结果图，再调整梯度不就可以了吗