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GB/T 5009.199--2003速测国标检出限探讨

农残检测


  • 速测国标GB/T 5009.199--2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》,相信关注的人都看过,以下讨论以国标的标准文本为准。

    以上是国标《GB/T 5009.199-2003》的内容,其中序号8和序号15的的两段说明,分别明确了无论是速测卡是酶抑制率法(速测仪器),都有次生物质及果蔬颜色干扰,以及存在反应温度和时间控制的问题。

    由于速测卡法的准确性太低,我们此处不予讨论。就酶抑制率法,国标给出的检出限指标,我们在此进行详细探讨。
    如上图所见,检出限指标列出几种在2003年左右广泛应用的高毒性农药,比如甲胺磷,即使2008年已经全面禁用, 在近期的定量检测中,却也时不时有该品种出现。甲胺磷的毒性极高,半数致死量(见文章底部解释)为29.1mg/kg。在速测国标中,其检出限为2mg/kg。但经多次重复检测,我们发现采用国标中的酶抑制率法(速测仪器),其实际检出限超出国标宣称检出限的5-10倍。 也就是说,即使蔬菜中甲胺磷含量是10-20mg/kg蔬菜,经过前处理的提取过程后,仪器也大都未能检出。
    这个数据并非危言耸听,我们在实际检测中,已经多次对国标中的酶抑制法进行验证。经分析,产生这个问题的主要原因可能是:在制定国标方法时,未充分考虑果蔬中农药残留的提取效率;而按照国标前处理操作流程(用5ml缓冲液作为提取剂,将1克蔬菜碎片放入浸泡、振荡提出农药残留),很难高效地提取极性较弱、亲脂性的农药残留;与此同时,根据国标中方法说明,为了避免果蔬样液本底颜色和次生物质的干扰造成的假阳性,很多操作人员采取整株不切碎的办法,在实验过程中,也不使用37°C水浴加热,这样虽然不容易出现假阳性。 殊不知,此举加剧了农药残留提取效率低的问题,导致实际检出限超过宣称检出限5-10倍的现象。也就是说,更严重的假阴性问题产生了。

    正因为现在酶抑制率法速测仪器的缺陷,正规的第三方检测实验室都没有采用速测仪做检测,也不会发布相关的农残速测结果。这也是为什么国家食药监局一直未能真正把农残速测结果作为执法依据的最主要原因,因为现在农残速测的实际准确度太低,如果在食药监基层使用现有农残速测仪做快检执法,只会贻笑大方。
    半数致死量指:使一群实验动物死亡一半时,每千克体重的毒物用量(毫克)。举例,甲胺磷的半数致死量为29.1mg/kg,使用20只实验用1公斤重白鼠,每只经口喂食29毫克甲胺磷,半数死亡。
    附注:有看到网友推荐拉曼光谱仪做农残速测,以下一并谈下个人的见解。拉曼光谱属于无损检测技术,虽然已有生物、药物及环境分析中痕量物质的检测应用研究,但距离实际应用还有相当的距离。原因主要是,食品中组分繁多,其体系的复杂程度远超药物或医学生物体液样本;在如此复杂的样品体系中,如何辨析痕量目标物的特征信号、如何提高痕量目标物的信噪比、如何有效合理地构建庞大的食品拉曼光谱数据库等等,都是目前研究中所需解决的问题。
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  • zyl3367898

    第1楼2017/03/23

    应助达人

    速测法只能做粗筛,蔬菜基地自检用的,如果定量还是气相气质,准确率更高些,至于拉曼光谱仪,可能还有很长一段路要走。

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  • 林默

    第2楼2017/03/24

    不解决蔬菜本底色干扰的问题,初筛也做不了。

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  • zyl3367898

    第3楼2017/03/27

    应助达人

    还是要用气相来定量定性,速测仪以粗筛为主。

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  • 林默

    第4楼2017/04/01

    现有的液态酶速测仪,准确性差,阳性符合率根本到不了80%的速测国标要求,初筛的功能根本实现不了。行内人士都知道,皇帝的新衣而已。

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  • zjn1123

    第5楼2017/04/01

    应助达人

    这东西就是自我安慰罢了,要不你让基层怎么活?没有人员,没有经费,如果全拿气相做也不现实,鱼与熊掌不可兼得

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  • zjn1123

    第6楼2017/04/01

    应助达人

    楼主有心了,文章写的有实际意义

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  • 林默

    第7楼2017/04/01

    现状是这样,所以大家都在糊弄。 但据我们的实践,至少固定化酶方法配上自动化仪器有了实用性。数据见图,也可下载附件,或浏览
    http://www.sh-linmo.com.cn/index.php?_m=mod_article&_a=article_content&article_id=129

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  • zyl3367898

    第8楼2017/04/01

    应助达人

    固定酶方法是在速测仪的基础上,加上固定酶,消除色素对结果的影响。韭菜也可以这么做吗?辛辣样品如何做?

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  • 林默

    第9楼2017/04/02

    版主问题提的好。大家都知道,如果有两个不同因素可以同时影响实验结果,唯一的解决之道是先控制住一个因素,然后想法控制住第二个因素。这样才可能真正解决问题。
    韭菜的假阳性问题其实是有两个因素同时引起的,一个是提取时的果蔬本底色,还有一个就是次生物质。我们通过固定化酶的方式将本底颜色干扰问题控制住了,然后在此基础上,研究所谓次生物质的控制问题。我们知道,其实所谓次生物质能影响酶抑制反应的结果,那么它对于酶的抑制作用其实和农药残留是一样的。最终找到了这种物质究竟是什么,就可以使用掩蔽剂来抑制次生物质,让它对酶的影响失效。
    使用液态酶的速测仪,就不太可能真正研究出对次生物质的抑制剂。因为颜色影响掺杂在实验里面,有时候有,有时候无,无法控制。还有现在液态酶速测仪的温度控制太粗糙。在多种不稳定因素影响下,做同一个样品,抑制率的差异可以到10%-20%,所以不太可能在此基础上,找出次生物质究竟是什么。
    现在也有公司在卖次生物质抑制剂,使用方法需要将样品先放入水中用锅加热,然后一系列步骤,最后添加所谓的抑制剂,才能起作用。其实如果操作过程中有步骤可能破坏样品中成分的完整性,比如水煮样品,或者微波消解,就不能真正有实效。

    第二个问题的答案同上,辛辣物质也可以被抑制剂抑制,但需要用合适的方法去发现怎样才能做到。

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  • zyl3367898

    第10楼2017/04/02

    应助达人

    不好解决的,但速测也有存在的市场。

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