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第1楼2017/03/27
9. 溶剂大峰或其它大面积峰后面或里面的少量痕量组分的检出
下面是一花生香精直接进样的部分TIC图
图 花生香精TIC图
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大家看看,上图的大峰是香精常用的溶剂丙二醇(PG),下面是放大后丙二醇TIC。
图丙二醇PG放大后的TIC
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看起来是一个峰,这个是很难判断里面是否有其它痕量组分。例如,用直接观察分析,即先仔细观察总离子色谱图(TIC),对在检索时,看看色谱峰是否有小的拐点分叉等,峰型有无变化,点击峰不同的地方看看离子有无变化。关注除匹配的化合物的离子以外的离子。利用经验知识,对某种柱子上的不易分离的物质对进行仔细分析。了解在这个保留时间附近可能重叠的组分等预判。但有时候可能会很难。
用amdis自动化质谱图解卷积和鉴定软件试试进行处理,可能是比较快捷的一种方法。但任何更好的检索出来里面夹杂的及痕量组分呢?更好的估算含量呢?是值得探讨的问题。如果设置参数不合理,就可能漏检或出现杂乱的结果,不易分辨,也增加工作量。另外就是怎样估算才能接近实际情况呢?
例如,在resolution ----medium;sensitivity----low;shaperequirements----medium下,检索结果如下:
23.843min, PG (丙二醇)0.0178%
24.121min,2-acetylpyridine 0.0107%
24.307min,PG 1.82%
24.3172min,PG 2.91%
这里PG总量为0.0178+1.82+2.91=4.747%,但从全图看PG明显是最大的主峰,显然不对,参考下面这个样品的总离子TIC图。
如果PG和2-乙酰基吡啶的比例按这个量来计算显然不对的,为4.747:0.0107,和实际相差甚远。
如果灵敏度设置提高,会出现的点更多,但amdis的表面总量能增加,但仍原低于100%。
图 样品的总离子TIC图
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另外这个样品的gc-FID图也是相同的情况。
图 gc-FID色谱图
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Shanghai gcMS lab. Area Percent Report
Data Path : D:\X_Driver_Backup\CN1\1101 Data File : CN11115A14.D
AcqOn : 22 Jul 2014 11:02 (#1); 22 Jul 2014 10:58 (#2)
Operator : jim zhu
Sample : 11115Peanut Flavor dl
Misc :
ALS Vial : 55 Sample Multiplier: XXX Samp. Amt.: 11105.7
Integration Parameters: events.e
Integrator: ChemStation 6890 Scale Mode: Large solvent peaks clipped
Method : C:\msdchem\2\methods\default.m
Title :
Signal : TIC: CN11115A14.D\data.ms
peak R.T. first max last PK peak corr. corr. % of
# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------
1 3.992 19 28 47 PV 113969 1420136 0.07% 0.066%
2 6.354 633 647 659 VV 3 15236 270391 0.01% 0.012%
3 8.715 1256 1266 1281 VV 16022 347963 0.02% 0.016%
4 12.809 2326 2340 2350 PV 4 5283 143174 0.01% 0.007%
5 15.388 2998 3017 3030 PV 10 8533 243882 0.01% 0.011%
6 16.613 3319 3338 3370 PV 2 105286 3233679 0.16% 0.149%
7 20.975 4444 4482 4508 PV 2331759 89742386 4.35% 4.143%
8 21.080 4508 4509 4526 VV 5 10259 233377 0.01% 0.011%
9 21.147 4526 4527 4533 VV 6 2594 19640 0.00% 0.001%
10 24.295 5117 5353 5675 PV 26012820 2061313157 100.00% 95.164% PG
11 25.546 5675 5681 5765 VB 9 3149 313648 0.02% 0.014%
12 26.594 5943 5956 5969 VV 9 5806 180456 0.01% 0.008%
13 26.859 6010 6025 6028 VV 7 4511 83668 0.00% 0.004%
14 26.917 6035 6040 6042 VV 4 6213 84208 0.00% 0.004%
15 26.931 6042 6044 6061 VV 7 6498 125062 0.01% 0.006%
16 27.787 6255 6269 6271 PV 8 6388 152975 0.01% 0.007%
17 27.827 6271 6279 6295 VV 8 6589 226623 0.01% 0.010%
18 29.310 6654 6668 6670 VV 8 6155 139331 0.01% 0.006%
19 29.321 6670 6671 6685 VV 6 6613 124845 0.01% 0.006%
20 29.577 6725 6738 6752 PV 9 4690 124365 0.01% 0.006%
21 32.419 7461 7483 7490 PV 6 40417 1351453 0.07% 0.062%
22 32.465 7490 7496 7513 VV 5 38524 1069858 0.05% 0.049%
23 33.879 7847 7866 7889 PV 3 77199 2572269 0.12% 0.119%
24 36.887 8639 8655 8674 PV 3 17343 613084 0.03% 0.028%
25 46.582 11182 11198 11210 PV3 5446 186150 0.01% 0.009%
26 54.622 13284 13307 13320 PV9 10242 309582 0.02% 0.014%
27 58.173 14223 14238 14240 PV9 24184 476829 0.02% 0.022%
28 58.187 14240 14242 14261 VV9 25543 606624 0.03% 0.028%
29 60.252 14770 14784 14785 PV 8 9029 97669 0.00% 0.005%
30 60.265 14785 14787 14788 VV2 9549 60259 0.00% 0.003%
31 60.278 14788 14790 14801 VV2 10838 167528 0.01% 0.008%
32 68.297 16892 16894 16896 VV3 8930 38802 0.00% 0.002%
Sum of correctedareas: 2166073073
Signal : CN11115A14.D\FID1A.CH
peak R.T. Start End PK peak corr. corr. % of
# min min min TY height area % max. total
--- ----- ----- ----- --- ------- ------- ------ ------
1 4.002 3.969 4.099 PV 72812 896859 0.05% 0.047%
2 4.694 4.650 4.776 PV 1100 19310 0.00% 0.001%
3 6.364 6.302 6.422 BV 5223 94927 0.01% 0.005%
4 6.646 6.610 6.696 VV 850 18067 0.00% 0.001%
5 8.724 8.675 8.809 PV 5263 117694 0.01% 0.006%
6 9.250 9.177 9.293 PV 867 22847 0.00% 0.001%
7 12.814 12.759 12.917 BV 1841 59796 0.00% 0.003%
8 15.397 15.304 15.502 BV 2494 80637 0.00% 0.004%
9 16.081 15.957 16.147 PV 997 46760 0.00% 0.002%
10 16.621 16.524 16.766 PV 40376 1285103 0.07% 0.067%
11 20.981 20.794 21.357 BV 1139024 42520155 2.29% 2.228%
12 21.365 21.357 21.399 VB 341 5305 0.00% 0.000%
13 24.301 23.381 26.103 BV 6955472 1858978310 100.00% 97.399% PG
14 26.159 26.103 26.205 VV 937 33725 0.00% 0.002%
15 26.214 26.205 26.245 VV 223 3457 0.00% 0.000%
16 26.604 26.524 26.686 BV 1683 55055 0.00% 0.003%
17 26.864 26.796 26.892 BV 1037 30919 0.00% 0.002%
18 26.929 26.892 27.011 VV 1905 64106 0.00% 0.003%
19 27.796 27.711 27.811 VV 1879 54940 0.00% 0.003%
20 27.830 27.811 27.906 VV 1998 57653 0.00% 0.003%
21 29.318 29.254 29.391 PV 2058 81796 0.00% 0.004%
22 29.577 29.526 29.637 PV 1364 40074 0.00% 0.002%
23 32.418 32.349 32.444 VV 13012 396409 0.02% 0.021%
24 32.466 32.444 32.647 VB 12913 452642 0.02% 0.024%
25 33.885 33.791 34.084 BB 35603 1245774 0.07% 0.065%
26 34.183 34.087 34.282 BB 1643 64624 0.00% 0.003%
27 36.387 36.314 36.462 BV 1745 55320 0.00% 0.003%
28 36.891 36.742 37.059 BB 7245 306802 0.02% 0.016%
29 46.582 46.374 46.709 BB 3327 157854 0.01% 0.008%
30 54.626 54.541 54.722 BB 3136 127027 0.01% 0.007%
31 58.179 58.084 58.336 BB 11391 561004 0.03% 0.029%
3260.289 60.127 60.352 BB 2596 86403 0.00% 0.005%
33 68.365 68.111 68.559 BB 5170 591536 0.03% 0.031%
Sum of correctedareas: 1908612888
default.m Fri Mar 2415:45:08 2017
从上面的积分结果看到TIC的PG面积百分含量为95.164%,FID的PG面积百分含量为97.399%。
导出amdis的报告的结果如下。
结果发现amdis的总的amount相加仅为8.934%,并非100%。这种情况我也没有很仔细的注意到的。Amdis在主峰处理时候仅仅显示了部分主峰的分数,而不是全部的面积分数。只是显示tagart的组分的amount,解卷积后的面积和含量。
在amdis的Help里面3.3.3.1 Component Mode Detail有下面一段话:
Amount The area of the deconvoluted component (Area) relative tothe total ion count for the entire chromatogram, expressed as a percentage.
PG的分数应该为100%-8.9344%+4.7478%=95.81339%,和TIC的PG面积百分含量95.164%差不多。
再看看2-乙酰基吡啶的情况,通过提取离子离子可以看到含量非常小。
图 2-乙酰基吡啶提取离子离子和PG的比较(小图)
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图 2-乙酰基吡啶提取离子离子和PG的比较
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第2楼2017/03/27
再看一个网友zwq1973(amdis定量问题http://bbs.instrument.com.cn/topic/6409974)例子
附件是我分析的一个数据文件,其中夹杂在丙二醇中有异丁酸乙酯,丁酸乙酯,乳酸乙酯,我通过amdis检索后丙二醇只抓到7.447的那段,含量只占整个配方的1.2%,而丁酸乙酯这么小含量为0.2%,丙二醇的含量明显不对啊,或者说amdis上读出来的丙二醇的面积不对了。我理解是没将所有丙二醇的面积算进去,那么丙二醇具体的量是多少怎么确定呢?或者丙二醇的总面积是多少怎么定呢?
先看看网友02066样品的总离子色谱图TIC:
图 网友02066样品的总离子色谱图TIC
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运行amdis后结果(初步参数)是ethyl butyrate 0.18%, PG 1.26%.。总的amount相加仅为14.8%。
PG的分数应该为100%-14.8%+1.26%=86.46%,和TIC的PG面积百分含量85.564%差不多。
附TIC百分面积%报告:
Area Percent Report
Data Path : C:\msdchem\1\DATA\other\
Data File : 02066.D
Acq On : 23 Feb 2017 17:25 (#1); 23 Feb17 5125 p (#2)
Operator :
Sample :
Misc :
ALS Vial : 1 Sample Multiplier: 1
Integration Parameters: events.e
Integrator: ChemStation
Method : C:\msdchem\1\METHODS\default.m
Title :
Signal : TIC: 02066.D\data.ms
peak R.T. first max last PK peak corr. corr. % of
# min scan scan scan TY height area % max. total
--- ----- ----- ---- ---- --- ------- ------- ------ -------
1 3.175 211 223 280 BV 14489576 492406185 3.69% 3.158%
2 6.195 576 842 1268 BV 4 10057428 13342930920 100.00% 85.564% PG(include ethylbutyrate)
3 8.397 1268 1293 1417 VB 1299899 56095934 0.42% 0.360%
4 14.115 2446 2465 2496 BB 2 116416 4094192 0.03% 0.026%
5 14.814 2573 2608 2620 BV 4 56359 1629991 0.01% 0.010%
6 15.362 2703 2721 2741 BB 2 88010 3170866 0.02% 0.020%
7 15.611 2750 2772 2802 BB 2 715521 25324049 0.19% 0.162%
8 16.044 2833 2860 2904 VB 2 396288 23720936 0.18% 0.152%
9 17.278 3097 3113 3135 BB 2 158243 5753441 0.04% 0.037%
10 18.930 3433 3452 3471 BV 3 112675 4259602 0.03% 0.027%
11 19.873 3616 3645 3677 BB 1846745 73845649 0.55% 0.474%
12 26.741 4883 5053 5122 BV 26679583 1300687468 9.75% 8.341%
13 28.874 5467 5490 5527 BB 3 394899 17360792 0.13% 0.111%
14 30.816 5861 5888 5929 BB 607172 26724145 0.20% 0.171%
15 31.791 6074 6088 6114 VB 80581 3593041 0.03% 0.023%
16 35.639 6858 6876 6901 BB 59869 2421198 0.02% 0.016%
17 36.916 7114 7138 7170 BB 101028 4825159 0.04% 0.031%
18 37.863 7302 7332 7356 BB 2 66233 3147504 0.02% 0.020%
19 39.272 7590 7621 7690 BB 2 662514 35540895 0.27% 0.228%
20 42.168 8194 8214 8246 BB 4 133133 5790679 0.04% 0.037%
21 42.622 8286 8308 8334 BV 6 88952 3882519 0.03% 0.025%
22 42.857 8334 8356 8400 PB 2 176786 9509640 0.07% 0.061%
23 44.143 8584 8619 8655 BB 3 249955 11171061 0.08% 0.072%
24 44.621 8682 8717 8752 BB 3 200258 9787748 0.07% 0.063%
25 53.334 10492 10503 10522 BV3 190808 4960113 0.04% 0.032%
26 53.472 10522 10531 10545 VV2 142753 3347295 0.03% 0.021%
27 53.958 10622 10631 10648 BV 108457 2524751 0.02% 0.016%
28 54.402 10713 10722 10736 BV3 65761 1426716 0.01% 0.009%
29 55.086 10853 10862 10898 BV 446343 9310515 0.07% 0.060%
30 60.617 11965 11996 12003 PV 51510 1562574 0.01% 0.010%
31 60.848 12008 12043 12065 VV 3852280 95721538 0.72% 0.614%
32 60.962 12065 12066 12069 VV3 185069 2239423 0.02% 0.014%
33 60.989 12069 12072 12099 VV 5 183402 5255097 0.04% 0.034%
Sum of corrected areas:15594021636
Signal : 02066.D\FID1A.ch
peak R.T. Start End PK peak corr. corr. % of
# min min min TY height area % max. total
--- ----- ----- ----- --- ------- ------- ------ ------
No peaks were detected using the methodintegration parameters!
default.m Sun Mar 2623:00:07 2017
可以看出amdis在搜索检索小的组分的效果不错,但定量只是大概。如果需要准确定量,可以考虑使用提取离子或SIM等方法来定量。