一、实验室场地要求
PCR实验室的场地明显区分于化学检测。对于实验室要求符合《GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测实验室技术要求》,要具备样品制备区、核酸提取区、扩增区和检测区四大功能区,并且对于各个工作区域的压力有一定的要求。我公司拥有完整的PCR实验室(如图),我们的方法开发也在这里进行的。请叫我摄影师!下面图片都是我拍出来的。PCR检测室
准备室
提取室
扩增室
检测室
二、实验仪器设备
1.荧光定量PCR测定仪(博日 FQD-96A)三、试剂和耗材
1.动物基因组DNA抽提试剂盒四、实验方法
(1)样品DNA的提取试剂名称 | 体积(μL) |
10×PCR反应缓冲液 | 5 |
dNTP | 4 |
上游引物 | 1 |
下游引物 | 1 |
Taq酶 | 0.5 |
模板 | 2 |
水 | 36.5 |
总计 | 50 |
变性 | 扩增 | 循环次数 | 最后延伸 |
94℃ 3min | 94℃ 30S | 35 | 72℃ 5min |
58℃ 45S | |||
72℃ 45S |
试剂名称 | 体积(μL) |
酶切缓冲液 | 2 |
Hph I酶 | 2 |
PCR扩增产物 | 16 |
总计 | 20 |