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【前处理】提取纯化心得

缘lies

2017/07/26

提取纯化步骤
1、初步提取
原则：尽可能用简单的方法获得更多的目的产物。可通过称重或测定提取物和提取后溶液相关指标检验。脂肽或糖脂类的生物表面活性剂均可用酸沉淀（pH调至2），酸沉淀达不到目的（目标产物仍在发酵液中），再考虑泡沫分离、超滤、有机溶剂萃取（可先浓缩发酵液再萃取）。
2、除杂
除杂方法很多，确定除杂效果，须先找到合适的检测样品方法，可以是气相、液相、离子、、SDS-PAGE薄层等，选用简单方便的薄层层析时，第一次上样先小浓度，如果样品斑点不清晰，直接上最大浓度，并选好展开剂。展开剂也需根据自己样品进行调试，我当时用的是苯胺-二苯胺显色剂，跑糖脂和脂肽效果较好。确定检验方法后，再利用有机溶剂（对脂质效果比较好）进行除杂。一般糖脂、脂肽、脂蛋白等脂类适合用氯仿：甲醇（2:1）进行除杂，当然不排除特殊情况。其除杂效果也要测定萃取前和萃取后的相关指标来确定。

点样量少

点样多
3、纯化

该步骤一般需要上常压柱子，凝胶柱或DEAE纤维素，根据洗脱液性能确定分离情况。上柱子时注意流动相、径高比等事项，需要反复试验，找到合适方法，其过程比较考验人。收集洗脱液后，可能样品被稀释，可以用超滤法对样品进行浓缩，完毕后检验纯度，如此反复，即使提取分离工作所在。
提取纯化工作相对发酵、分子而言，相对较难。希望以上经验能为初做课题的小伙伴或实验遇到问题的老伙伴们提供借鉴。大家可以随时提问。

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荆棘鸟

第1楼2017/10/28

应助达人

感谢楼主分享实操经验，看到这个点板让我回想到上学时做过的色素类的分离-薄层色谱法。

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