意想不到盐酸羟胺的不稳定性对实验结果的影响

意想不到盐酸羟胺的不稳定性对实验结果的影响

在前面的二篇中提及了Tris的检测，经过近一个月的努力，顺利完成了Tris的方法开发和验证。今天谈谈另一个化合物的检测验证，盐酸羟胺，在Tris快完成之际，接到另一家客户的要求，检测某一药物中残留的盐酸羟胺。

天下哪有这么好的事，盐酸羟胺和Tris结构类似，理论上检测方法可以完全套用，除了淋洗液和柱子不一样外，后面的补液模式可以完全照抄！分离方法可以基本按照Tris 的方式（阳离子分离，柱后补碱，安培检测）。

在开始做之前，我问了对方，盐酸羟胺的稳定性，稳定。同时，我上网简单查了一下，没有提及不稳定的事，这样完全照搬Tris的检测模式，OK。

在对方厂家测试人员的协助下，按照设计的方案，排好序列，连续进样80针就够了，时间大约14-16小时，为了加快速度，通宵进行，由于担心仪器晚上会突然断开(ICS5000)我通宵查看系统，果然半夜里软件连接突然断了一次，重新连接后就没再断开了，在连续进样的过程中，我感觉有点不对，很低浓度下，怎么没有盐酸羟胺的峰（理论计算是有呀，能看到），峰感觉在变小，似乎不稳定，半夜里只能继续做下去了。

第二天在分析大批数据后，终于感觉到不对了，盐酸羟胺会分解！所有实验结果泡汤了！赶快上网查资料，的确有明确提及盐酸羟胺不稳定，但如何稳定没说呀！查到相关分析的一篇类似文献，提及用流动相溶解，但其数据和结果似乎表明其检测限比我们高近10倍，他们做的很有问题。怎么办？样品不稳定这样实验做起来就麻烦了，羟胺，盐酸羟胺，我明白了，没有单独的羟胺的实际样品，只有盐酸羟胺，这就意味着只要盐酸的存在，不稳定的羟胺变成了稳定的盐酸羟胺，酸性条件稳定，也理解了论文用流动相溶解的意思。

重新设计实验，盐酸羟胺稀释不用水稀释而是用跟淋洗液几乎一样的淋洗液浓度进行稀释，在酸性条件下，这样可以避免盐酸羟胺的分解。重新配溶液上机，在仅仅改变样品的溶解稀释方式，整个实验的重复性非常好，盐酸羟胺峰面积稳定回收率合格，而实验仅仅改变了一点！！

在实验中，由于做检测限，盐酸羟胺的浓度非常低，羟胺水解的效应非常明显，当浓度高时，不是很明显，这就是为什么一开始做了半天没发觉的缘故。对比这二个实验，Tris和盐酸羟胺结构类似，测试方法几乎一致，但完全照抄在实际中却遇到问题，说简单很简单，说复杂也不简单。Tris作为缓冲液肯定是稳定的，这是二者的差异。

这也验证了做方法学的主要关键之一，样品的稳定性必须先验证。