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【求助】液相峰分不开,请教!

液相色谱(LC)

  • 我做的是用液相测取水中的丙烯酰胺,样品是从油条中提取出来的.

    agilent1100的,UV检测器,检测波长:210nm. C18固相萃取柱4.6μmX150cm i.d 5μm

    流动相:甲醇:水=5:95 ; 流速0.5ml/min ; 进样量:10μl ;柱温:40度

    出来三个峰分不开,前面一个峰还没出完后面一个峰就跟上了.出峰时间大概在2.5min左右.

    试过流动相甲醇:水=10:90和3:97,峰型差不多,没有改观。

    使用梯度洗脱流动相甲醇:水先设20:80,后设5:95,峰型略为分开(仍没分开)且峰型变宽。

    实验不知道怎么做了,条件还可以怎么改?望各位大侠指教,谢谢了!
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  • realtiger

    第1楼2007/01/04

    梯度洗脱流动相 甲醇:水先设80:20,梯度到5:95
    另外,可以使用25厘米的柱子

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  • fmwxq

    第2楼2007/01/04

    同一上楼的看法,有必要还可以考虑流动相的pH

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  • 深海的海豚

    第3楼2007/01/04


    1. 降低柱温
    2. 更换其他色谱柱,可能有改善
    3. 使用缓冲盐体系替代水。

    wh0151 发表:我做的是用液相测取水中的丙烯酰胺,样品是从油条中提取出来的.

    agilent1100的,UV检测器,检测波长:210nm. C18固相萃取柱4.6μmX150cm i.d 5μm

    流动相:甲醇:水=5:95 ; 流速0.5ml/min ; 进样量:10μl ;柱温:40度

    出来三个峰分不开,前面一个峰还没出完后面一个峰就跟上了.出峰时间大概在2.5min左右.

    试过流动相甲醇:水=10:90和3:97,峰型差不多,没有改观。

    使用梯度洗脱流动相甲醇:水先设20:80,后设5:95,峰型略为分开(仍没分开)且峰型变宽。

    实验不知道怎么做了,条件还可以怎么改?望各位大侠指教,谢谢了!

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  • wh0151

    第4楼2007/01/04

    谢谢各位大侠指点,那就先改改梯度试试吧.另外,能问一下缓冲液选用什么对柱子伤害比较小啊?这个是反相的.谢谢

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