出口粮谷、蔬菜中百草枯残留量的测定方法验证

承之

2018/10/31

私聊

农残检测

1 方法依据
本方法依据SN 0340-95 《出口粮谷、蔬菜中百草枯残留量的测定》。
2 方法原理
试样中百草枯用硫酸溶液煮沸回流加以提取，提取液经阳离子交换树脂柱净化，百草枯被吸附在树脂上，然后，以饱和氯化铵溶液洗脱，于流出液中加入连二硫酸钠溶液，百草枯被还原为蓝色化合物，用紫外分光光度计进行定量。
3 试剂
3.1 硫酸（比重1.84）
3.2 氢氧化钠。
3.3 氯化钠。
3.4 盐酸（比重1.18）
3.5 氯化铵
3.6 L-胺四乙酸二钠（EDTA）
3.7 苯
3.8 连二亚硫酸钠
3.9 硫酸溶液：9mol/L
3.10 盐酸溶液：2mol/L
3.11 氢氧化钠溶液：12.5mol/L
3.12 氢氧化钠溶液：10mol/L
3.13 氢氧化钠溶液：0.3mol/L
3.14 饱和氯化钠溶液：溶解360g氯化钠于1L水中，搅拌溶解，澄清备用。
3.15 饱和氯化铵溶液：溶解370g氯化铵于1L水中，搅拌溶解，过滤备用。
3.16 稀氯化铵溶液：1/10饱和溶液。量取1份饱和氯化铵溶液加入9份水，混匀。
3.17 连二亚硫酸钠溶液：0.2%于0.3mol/L氢氧化钠溶液中。溶解0.20g连二亚硫酸钠于少量0.3mol/L的氢氧化钠溶液中，于棕色容量瓶内以该氢氧化钠定容至100ml，混匀。此溶液必须在临使用前新鲜配制，超过1.5h后不宜使用。
3.18 离子交换树脂：AG 50WX-8，100~200目，在水中浸泡。
3.19 百草枯标准品
3.20 百草枯标准溶液：准确溶解0.0250g百草枯标准品于少量饱和氯化铵溶液中，转移至250ml棕色容量瓶中并以饱和氯化铵溶液准确定容，摇匀，作为标准贮备液，此溶液百草枯二氯化物的浓度为100ug/ml。根据需要再配成适用浓度的标准工作液。
4仪器和设备
4.1 紫外分光光度计：具有连续波长与吸收扫描功能，配备5cm比色皿
4.2 粮谷粉碎机：筛板孔径1mm
4.3 组织匀浆机
4.4 减压抽滤装置：配备1000ml抽滤瓶及直径10cm平底漏斗
4.5 加热回流装置：1000ml圆底烧瓶及配套的球形冷凝管。
4.6 净化柱：50ml酸式滴定管。在玻璃珠的下部塞入一小团玻璃棉，高度约0.5~1cm，垂直固定好柱子，加入10ml在水中浸泡并沉降的树脂，分别用50ml饱和氯化钠溶液和50ml水洗柱。注意保持液面略高于树脂层。每个试样测定均须使用一根新制备的柱子。
5分析步骤
5.1 提取
称取粮谷试样约50.0g或蔬菜试样200.0g（精确至0.1g）置于1000ml圆底烧瓶中，根据试样的含水量加入适量的水和9mol/L的硫酸溶液，使瓶内溶液的总体积为200~300ml（包括试样的含水量）、硫酸的浓度为2.5mol/L。加入数粒小玻璃珠，连接回流冷凝管。加热至沸（如产生大量气泡可加入几滴正辛醇）并使之回流5h以上。取下烧瓶，冷却，加入500ml水。将提取液倒入已铺垫好双层快速滤纸（含油试样克多垫几层滤纸）的平底漏斗上，用抽滤装置过滤，用少量水分数次洗涤。对非油类试样，将滤液倒入1000ml烧杯中。对含油试样可将滤液倒入1000ml分液漏斗中，然后用100ml苯分三次萃取，收集水相于1000ml烧杯中。于烧杯中的溶液中加入12.5mol/L的氢氧化钠溶液，其体积相当于回流前所加9mol/L硫酸溶液的量，加入5gEDTA，搅拌至完全溶解，加水至溶液总体积约900ml，然后再用10mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9,冷却至室温，将溶液全部倒入1000ml的分液漏斗中备用。
5.2 净化和洗脱
5.2.1净化
将盛有提取液的分液漏斗固定在净化柱的上方（可用洁净的胶管将二者连接），调节活塞，使溶液以10~12ml/min的速度过柱。过柱后移开分液漏斗。然后以5ml/min的速度一次用50ml水、50ml 2mol/L的盐酸溶液、50ml水和50ml稀氯化铵溶液淋洗柱子，弃去所有流出液。
5.2.2洗脱
将上述处理后的柱子用饱和氯化铵溶液洗脱上百草枯，洗脱速度为0.5~1ml/min，收集50ml洗脱液于50ml容量瓶中。
5.3 测定
吸取10ml含包草枯二氯化物为1.0ug/ml的包草枯标准工作液于50ml比色管中，加入2ml连二亚硫酸钠溶液，摇匀后立即倒入5cm比色皿中，置于紫外分光光度计比色皿中进行测定，设定波长从410nm至380nm进行吸光度扫描，选择最大吸收峰处为测定波长λm，然后分别选择λm±4nm处为校正波长λn和λ1
5.4 工作曲线的绘制
分别吸取百草枯标准储备溶液0.00ml、0.05ml、0.10ml、0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml和1.50ml于8只100ml容量瓶中，各加入饱和氯化铵溶液至刻度。此工作液百草枯的浓度分别为0.00ug/ml、0.05ug/ml、0.10ug/ml、0.25ug/ml、0.50ug/ml、0.75ug/ml、1.00ug/ml和1.50ug/ml。分别吸取上述工作液10ml于8支50cm比色管中，各加入2ml连二亚硫酸钠溶液，混匀后立即用紫外分光光度计，在λm处以空白液对照测定工作液的吸光度，以吸光度为纵坐标，相应浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.5 样品测定
吸取10ml洗脱液于50ml比色管中，加入2ml连二亚硫酸钠溶液，混匀后立即以空白页对照分别测定吸光度
5.6 空白试验
除不称取样品外，按上述测定步骤进行。
6结果计算
由下式计算试样中包草枯（以百草枯二氯化物计）的残留量：
X=C×V₁/m
式中：
X—试样中百草枯二氯化物的残留量，mg/kg；
C—从标准曲线中以样品的校正吸光度值（A校）查出对应的百草枯二氯化物的浓度，ug/ml；
m－试样的质量，单位为克（g）；
V－洗脱液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
7试验结果报告
7.1校准曲线及线性范围：

工作曲线	顺序号	1	2	3	4	5	6	7	8
	浓度（ug/ml）	0.00	0.05	0.1	0.25	0.50	0.75	1.0	1.5
	吸光值（A）	0.000	0.021	0.051	0.113	0.246	0.336	0.478	0.678
回归方程		y = 0.4569x +0.0033
相关系数		0.9981

7.2 方法的精密度
称取约50.0g样品，按照步骤5处理，平行制备9份样品，计算的含量并求出相对标准偏差，结果见下表所示。

顺序号		1	2	3	4	5	6	7	8	9
1	取样量（g）	50.0039	50.0023	50.0081	50.0106	50.0071	50.0096	50.0032	50.0054	50.0028
	吸光度（A）	0.286	0.281	0.283	0.288	0.289	0.288	0.285	0.281	0.279
	百草枯含量（ug）	15.40	15.13	15.24	15.51	15.56	15.51	15.35	15.13	15.02
	浓度 mg/kg	0.31	0.30	0.31	0.31	0.31	0.31	0.31	0.30	0.30
平均值	0.31 （S=0.0039）
相对标准偏差 RSD(%)	1.28
备注		结论：九个平行样品的相对标准偏差为1.28%，小于5%，符合要求。

7.3方法的中间精密度
随机选取2名实验人员，按照步骤5测定多菌灵的含量，每个实验者平行测定3份样品，求出两者实验结果的相对标准偏差，结果见下表所示。

表2 中间精密度实验结果

实验者	百草枯含量(mg/kg)	平均结果(mg/kg)	相对标准偏差(%)
甲	0.31	0.30	2.49
	0.30
	0.30
乙	0.29	0.30
	0.30
	0.31
接受标准: 从精密度测试所得的6组数据中间精密度测试的相对标准偏差应小于5.0%。

7.4方法的准确度
分别向试样中加入一定量的百草枯，使其百草枯的加标浓度为10mg/L的样品2ml、分别制备3份样品，同时测定未加标样品百草枯含量，分别计算回收率、结果见下表所示。

样品			标准品			样品加标测量值		回收率（%）	平均回收率（%）
浓度（mg/kg） M₁	取样量（g）	百草枯含量 (mg)	浓度（mg/ml）	取样量（ml）	M₂ (mg)	吸光度（A）	浓度（mg）M	回收率（%）	平均回收率（%）
12.6	50.0309	13.5	10	2	10	0.603	32.7	94.5	100.8
12.6	50.0725	12.1	10	2	10	0.611	33.1	105.0
12.2	50.0024	11.8	10	2	10	0.598	32.4	103.0
备注			△%=(M- M₁)*100/ M₂

7.5 检出限
DL=0.02mg/kg
取20次平行测定空白样的结果，按IUPAC规定DL=KSb/a
其中K=20
Sb:空白多次测得信号的标准偏差：0.0008
a: 校准曲线的斜率: 0.4569

顺序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
吸光度(A)	0.007	0.008	0.007	0.006	0.007	0.006	0.008	0.007	0.008	0.007
顺序号	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20
吸光度(A)	0.006	0.007	0.007	0.008	0.006	0.006	0.008	0.007	0.008	0.008
Sb	0.0008
检出限(μg/g )	0.02
公式	DL=fKSb/a （ K=3, Sb:空白信号的标准偏差，a:曲线斜率）
备注	DL=K*Sb/a