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尿液中新蝶呤和生物喋呤的检测

吕梁山

2018/11/05

尿液中新蝶呤和生物喋呤的检测

蝶呤类化合物属于蝶啶衍生物，是一种碱性物质，包括新蝶呤、生物蝶呤、黄蝶呤等，主要存在于人体的体液中。其中，新蝶呤（neopterin，NP）和生物碟呤（biopterin，BP）是体内三磷酸鸟苷（GTP）的代谢产物，用于多种疾病的辅助诊断，还与体内的苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的代谢有关，BP缺乏会引起苯丙氨酸代谢紊乱和神经递质的改变，尤其在鉴别新生儿高苯丙氨酸血症分型时，尿液中的蝶呤含量起到关键作用。因此，有效分离分析尿液中的NP和BP具有很重要的临床意义。
实验原理
尿液中的NP和BP均以还原态和氧化态的形式混合存在，还原态的NP和BP没有荧光吸收，因此在测定前需先用碘氧化尿样，把还原态的NP和BP转化为氧化态再稀释上机测定。
色谱条件
色谱柱：Kromasil Eternity XT C18（4.6×250mm，5μm）
柱温箱温度：22℃
波长：Ex=350nm，Em=460nm
流动相：甲醇：水=10:90（V/V）
流速：0.6 ml/min（其中4-11min时流速为1.0 ml/min）
进样体积：20μL
采集时间：20min

图1：NP（1.0 μg/mL）与BP（1.08 μg/mL）标准品混合溶液色谱图

总结
尿液中的蝶啶衍生物较多，容易干扰NP和BP的检测。因此将NP和BP与其他蝶啶类衍生物分离至关重要。样本经前处理后，采用Kromasil Eternity XT C18色谱柱分离尿液中的NP和BP，具有很好的分离度（R>1.5），可消除尿液中杂质对NP和BP的干扰，实现样品的精确分析。Kromasil Eternity XT系列的色谱柱耐pH范围1-12，对复杂生物样品的分离分析具有重要意义。
注：由深圳爱湾医学检验实验室验证

附件：

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