Ultimate XB-C18 检测角黄素

1．2色谱条件

月旭色谱柱:Ultimate XB-C18 4.6×250mm，5um Part Number 00201-31043 SerialNumber 211302350，流动相：v(0.1％的甲酸)：y(乙腈)=3：97，流速：0．4 mL／min，柱温：35℃，检测波长：470 nm，进样量：3．0ul。

1．3实验方法

a.试样的制备

抽取河豚鱼、鳗鱼和烤鳗样品约500 g，取可食用部分，绞碎，充分混匀，分装入洁净的容器内，密闭并作好标记，-18℃冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染，且尽可能避光操作，减少氧气接触机会并尽快完成，防止角黄素含量发生变化。

b.提取

称取5．00 g试样于50 mL具塞离心管中，加入10 g无水NazS04，0.1g焦性没食子酸，乙腈20 mL，用组织捣碎机均质提取1 min。以3000 r／min离心3 min。移取上层乙腈于另一个50 ml塑料离心管中。重复上述步骤，合并乙腈提取液，待净化。

c.净化

在乙腈提取液中加入20 mL乙腈饱和的正己烷，涡旋混匀后振荡3 min，以2000 r／min的转速离心2 min，弃去上层正己烷，取乙腈层20 mL，旋转蒸发近干，用1．0 mL乙腈溶解残渣，滤膜过滤，供液相色谱分析。

2结果与讨论
2．1提取条件的优化
角黄素对光和氧及过氧化物敏感。为保持样品中角黄素的稳定性，本文在提取步骤中添加焦性没食子酸作为抗氧化剂。实验表明，焦性没食子酸加入量为0．1 g即可有效防止样品中角黄素含量发生变化。角黄素的分子结构中因含氧具有一定的极性，在极性有机溶剂中有较大的溶解度。经实验对比，采用超声波、振荡和均质提取3种方法，均质提取的回收率最高，而且相对稳定，简便快速。所以本方法采用均质器匀浆1 min，重复提取2次的方法进行提取。
2．2净化方法的选择
食品中角黄素提取溶液的净化，本方法采用硅胶柱、氟罗里硅土、中性氧化铝及C18等小柱，正己烷溶液上柱，丙酮一正己烷溶剂体系(5％一100％)洗脱，其回收率不能令人满意(在不同小柱上回收率在25％～65％之间)。实验还测试了采用GPC的净化效果，角黄素不能与脂肪峰完全分开。采用正己烷脱脂，既可满足HPLC的检测要求，又可减少被测物在操作过程中损失，获得了满意回收率。
2．3流动相的选择

比较了甲醇／水体系和乙腈／水体系作流动相对河豚鱼和烤鳗样品的分离分析，发现分离效果优劣顺序为y(乙腈)：v(o．1％甲酸)=97：3、y(乙腈)：y(水)=95：5，y(甲醇)：v(0．1％甲酸)=95：7，V(甲醇)：V(水)=95：5；即用y(乙腈)：v(0．1％甲酸)=97：3时角黄素与干扰峰分离较好，峰形对称。所以本方法选择y(乙腈)：v(0．1％甲酸)=97：3作流动相。以0．40 m1．／min的流速等度洗脱，角黄素的保留时间为1．1 min。角黄素标准品的色谱图、河豚鱼、鳗鱼和烤鳗的空白样品色谱图和空白样品添加最低检出浓度角黄素的色谱图见图1。









图1角黄素标准溶液、空白样品和添加样品的色谱图

1一反式角黄素；2一顺式角黄素；a一角黄素标准溶液；b一河豚鱼空白样品与河豚鱼加标样品；

c一鳗鱼空白样品与鳗鱼加标样品；d一烤鳗空白样品和鳗鱼加标样品

2．4线性和灵敏度

在0．05～2．0 mg／L浓度范围，角黄素呈良好线性，相关系数r=0．9999，回归方程为Y=85．7p+191。分别以3倍信噪比(SIN=3)和lO倍信噪比(s／N=10)确定本方法的最低检出限和定量限。结果表明，不同基质中角黄素的LOD值和LOQ值略有差异，LOD均不大于0．01 mg／kg，LOQ值均不大于O．05 mg／kg(表1)，可满足各国对角黄素的限量要求。

2．5回收率和精密度

采用标准添加法，在空白河豚鱼、鳗鱼和烤鳗样品中添加3个浓度水平的角黄素标准溶液，每个水平下平行测定6次。实验数据表明，方法的平均回收率为82．5％一97％，相对标准偏差(RSD)为6．9％～15％(表1)。

河豚鱼？是珍稀动物那种吗

河豚鱼检测 珍稀动物

应助达人

这个很常见的鱼啊

我们这边见得少

很少见C8色谱柱的应用文章！