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如何选择未知样品的合适波长以及空白出峰较大有影响如何解决

m3116636

2019/03/28

液相色谱（LC）

问题一：
在方法开发时中控样品的波长如何选择呢？现使用的流动相为0.1%磷酸/乙腈，走梯度
之前在Agilent上走，波长为220nm，后来转移到了岛津上面，检测器为PDA，我发现210nm和220nm下两者响应度相差较大且峰的相对比例也不一样。
那么我们如何选择最合适的波长，依据什么去选择呢？
以下附图

问题二：在走空白的过程中发现空白里面有出峰，且出峰位置不变，大小不同，并且在210nm下空白峰高于220nm且高了好几倍。
空白是甲醇，流动相等等同样品，它的出峰位置与上面样品出峰的位置相重叠，在样品浓度较低的时候可能造成较大影响。那么我们如何处理呢，我试过冲洗柱子，但是依然未能减弱，而且大小并不固定，随着进样量越大，出峰越大。
以下附图2ul和5ul时在210nm和220nm下的出峰图谱。
求助如何改善，这种情况下的产品检测又是否会被承认呢？
进样量2ul

进样量5ul

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支点

第1楼2019/03/28

应助达人

1、PDA检测器应该可以采集并查看光谱图吧，针对每个组分的光谱图的最大吸收做检测波长。
2、如果确定是杂质的话还是要改变洗脱条件，当然不同波长下的谱图可能杂质的影响可能也会变小。还是要自己试试。

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moviehua

第2楼2019/03/28

应助工程师

PDA 可以选择全扫描，这样来确定最大吸收波长，对于空白有大峰那就需要来排查原因了

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