双甲脒以及代谢物测定GB/T21169-2007

应助达人

准确称取4 g试样(精确至0.01g)于50 mL离心管内，加入5 mL饱和氯化钠水溶液，混匀，准确加入10mL乙腈，用均质机以10000 r/min 的速度均质30 s，振摇， 3500 r/min离心5 min，移取5ml上清液至另一50 mL离心管中，加入5mL乙腈饱和正己烷，涡旋混匀1min，3500 r/min离心5 min，准确移取下层乙腈2.5mL于10mL比色管中，加水定容至5 mL，混匀，15000 r/min离心5 min，过0.22 μm滤膜至进样瓶中，上机测试。

【说明】
提取溶剂直接经净化稀释上机，应使用色谱纯乙腈； 涉及定量，应准确移取；
由于双甲脒代谢物（2,4-二甲基苯胺）的极性较强，在上机溶液和起始流动相比例均在50%乙腈条件下目标物在反相C18柱上保留较弱，干扰较大，故检测时选择对极性化合物保留更强的HSS T3 1.8μm柱。
实验发现，目前实验室常用的津腾有机滤膜本身材质含有2,4-二甲基苯胺，故检测时应选用安谱或迪马品牌的有机滤膜进行过滤，防止污染。

应助达人

仪器：LC/MS
色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm
柱温：30 ℃；进样量：10 μL；
流动相：A: 5mmol/L醋酸铵水（含0.1%甲酸），B: 乙腈 流速： 0.2 mL/min；梯度洗脱
Iron Source: ESI ；Capillary: 4 kV；Fragmentor:135；Delta EMV: 300；Gas Temp: 350 ℃； Gas Flow: 11 L/hr；Nebulizer: 35 psi。
Time(min) 0.0 1.0 1.2 4.5 5.0 10
A% 50 50 10 10 50 50

应助达人

你们是如何前处理的？

按照21169-2007上的方法提取的：5g试样加5mL 0.1mol/L 氢氧化钠于50mL离心管中，涡旋混匀1min，再加15mL混合提取液（正己烷-异丙醇6:3）涡旋1min，4000转离心5min，吸取上层液于50mL圆底烧瓶中；下层液体再加10mL正己烷涡旋1min，离心，吸取合并上层液，40度水浴旋蒸浓缩至干，用0.5mL乙腈溶解残渣，转移至1.5mL离心管中，再加入0.5mL水溶解残渣，合并转移至1.5mL离心管中，混匀（这里方法上有个10000转离心5min，我没做，难道这步出问题了？？？我前面做蜂蜜样品的时候做了这一步，离心后没什么效果，所以后来做加标回收的时候就省掉了），过膜，待测。

好像我们实验室的滤膜就是津腾的，明天仔细看看。

应助达人

你省了一次离心，可能这个过程出问题了。要按标准做全的。

不过我做空白的时候过滤膜没有发现什么污染，就是样品里面的附近的干扰峰挺多的。可能液质太灵敏了，能够检测到滤膜的污染

恩恩，我感觉应该不是这个问题，不过下次再做的时候就做全看看