液相色谱泵及色谱柱对丹参酮类化合物分离度影响
1. 色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.02% 磷酸溶液为流动相B ，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为20°C;检测波长为270 nm。理论板数按丹参酮II A峰计算应不低于60000。
表1 梯度洗脱程序表
2. 对照品溶液的制备
取丹参酮II A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成25.2 μg/mL溶液，即得。
3. 供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛）约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率140W，频率42kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4. 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL, 注入液相色谱仪测定。以丹参酮IIA对照品为参照, 以其相应的峰为S 峰，计算隐丹参酮、丹参酮I的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的± 5 %范围之内。相对保留时间及校正因子见下表：
表2 药典丹参酮类化合物相对保留时间及校正因子
5. 结果与讨论
5.1 二元高压泵色谱峰定位
依次将隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA对照品溶液在配置有二元高压泵的液相色谱仪上机分析，在依据保留时间对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA进行色谱峰定位。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA色谱图及保留时间见下图。
图1 丹参酮I色谱图
图2 隐丹参酮色谱图
图3 丹参酮IIA色谱图
5.2 四元泵色谱峰定位
依次将隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA对照品溶液在配置有四元泵的液相色谱仪上机分析，在依据保留时间对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA进行色谱峰定位。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA色谱图及保留时间见下图。
图4 四元泵隐丹参酮色谱图
图5 四元泵丹参酮I色谱图
图6 四元泵丹参酮IIA色谱图
5.3不同色谱柱对丹参酮类化合物分离度影响（二元高压泵）
在配置有二元高压泵的液相色谱仪上，分别以XDB C18、SB C18色谱柱分析同一丹参药材供试品溶液，色谱图见图7、图8。
图7 XDB C18色谱柱药材色谱图
图8 SB C18色谱柱丹参药材色谱图
5.4 不同泵对丹参酮类化合物分离度影响
分别在在配置有二元高压泵、四元泵的液相色谱仪上，SB C18色谱柱分析同一丹参药材供试品溶液，色谱图见图9、图10。
图9 SB C18色谱柱丹参药材色谱图（二元高压泵）
图10 SB C18色谱柱丹参药材色谱图（四元泵）
6 讨论
6.1 丹参中丹参酮类化合物含量测定时不同色谱柱、不同类型的泵对隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA分离度影响较大。
6.2 丹参酮类化合物在同一厂家二元泵的分离度优于四元泵，二元泵仪器上隐丹参酮、丹参酮I分开，隐丹参酮、丹参酮I在四元泵仪器采集色谱图上是一个对称性良好的一个色谱峰，未见分开趋势。
6.3 不同类型的C18色谱柱对于丹参酮类化合物分离度也有影响，本实验中二元泵仪器上XDB色谱柱分离丹参酮类化合物效果优于SB色谱柱。
综上，建议测定丹参中丹参酮类化合物时选择合适的仪器、色谱柱，丹参酮类化合物才能更好分离，进而准确定位及含量计算。
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