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HPLC产物不出峰，问题在哪？

液相色谱（LC）

  • 产物是小分子叶酸（folate,最大吸收波长254、283、363nm）与双亲分子NH2-PEG-DSPE的连接产物，产物的最大吸收波长及吸光系数与叶酸相同。所以我用叶酸做外标来分析产物纯度。
    柱子是C18，流动相是PBS:甲醇=9:1，流速1ml/min,阵列检测器扫描220-400这一段波长，叶酸出峰时间7.8min,产物60min都没有峰；我把流动相调整成PBS:甲醇=9:3，叶酸保留时间2.5min,产物60min仍然不出峰。求指导这是怎么回事？另外我第一次进的样如果因为运行时间过短没有冲出来，会不会在后续的进样中冲出来？
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  • 该帖子已被版主-轶辰加3积分，加2经验;加分理由:鼓励发帖
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    +关注 私聊

  • hujiangtao

    第1楼2019/07/16

    应助达人

    把叶酸加到样品里看看

0
    +关注 私聊

  • 我是风儿

    第2楼2019/07/16

    应助达人

    第一次进样没有冲洗出来的，当然会再下一针中流出来的

0
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  • dadgoh

    第3楼2019/07/16

    应助达人

    用叶酸最大吸收波长检测一下看看。

0
    +关注 私聊

  • 湫语

    第4楼2019/07/16

    应该是你的产物没洗脱出来，你试一试0.1%甲酸水 乙腈=9：1，或者调一下流动相的PH试一试

0
    +关注 私聊

  • mengzhaocheng

    第5楼2019/07/16

    应助达人

    是不是浓度不够呢？

0
    +关注 私聊

  • 支点

    第6楼2019/07/17

    应助达人

    试试梯度洗脱，后面的甲醇浓度再提高到100%

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