F7100荧光分光光度计的操作方法

laladance

2019/10/24
水分子

私聊

分子荧光光谱

开启计算机，然后开启主机，等待10s后，主机声音停止后，打开FL solutions软件，仪器进行自检，指示灯从黄色变成绿色后，就可以开始选择测试模式和相关参数。
1. 基本光谱扫描：
点击FL solutions右侧的Method选项，选择General选项中的Measurements，选择Wavelengthscan，然后点击Instrument选项，在Scanmode中选择激发或者发射的模式，并在相应的对话框中输入相应的波长:“Em/ExWL”,“Em/Ex Start WL”和“Em/Ex End WL”测试需要的波长范围，然后在Datamode选择Fluorescence，扫描速度一般选择240nm/min,Delay选项不要动，狭缝宽度一般选择5.0，PMTVoltage选择400 或700，如果指定，则选中后输入数值，响应时间选择自动，选择“ShutterControl ”打 √ ,以使仪器在光谱扫描时自动开启,而其他时间关闭。其他的参数选择默认值。
（注意：对于激发光谱的测试，激发光终止与起始波长差不小于10nm，发射波长要比激发波长的最大值要大（差值20nm比较合适）。对于发射光谱，发射波长的起始波长要大于激发波长。
参数设置好后，就可以开始测试，样品量为比色皿体积的一半，选择measure选项，然后自动扫描。
扫描完后，点击file，保存数据，点击saveas，保存成txt格式。
2. 量子产率的测试
2.1测试条件摸索：
用积分球测激发波长和发射波长
注意：积分球要防潮防污染。
假设激发扫发射：
在发射模式下，以紫外区波长作为激发，区间尽量大
发射波长在600nm一下，无须光谱校正，600nm以上需要光谱校正，避免红外紫移的现象。
Response:自动；
shuttercontrol 打开，以保护样品，防止光敏性样品的破坏。
Repeat： 1
delay：一般情况无需改动，除非样品有反应过程或者有温控
Instrumentmonitor：选择open dataprocessing window after……..
Report：printall data point！
改变激发波长±10nm，无移动即为发射峰，待谱图变成蓝色时，复制，粘贴，将谱图堆叠。
扫激发光谱：（在发射1/2处有杂峰）选取最佳激发。
确认激发波长扫发射光谱：发射波长在激发波长的1-2倍之间，则为最佳激发。
2.2量子产率测试：
a.测直接激发无样品（Al₂O₃）：
扫发射，λEm : start: λEx - 20nm，发射强度在10000以内（接近10000），若超出，则调节狭缝值，如果狭缝设置到最小，还是高于10000，则调节光电倍增管电压；
注意勾选光谱校正！！
数据另存为直接激发无样品

b. 测直接激发有样品，直接点测量，保存数据为直接激发无样品

c.测间接激发有样品：保存数据为间接激发有样品

d.测间接激发无样品：保存数据为间接激发无样品
- 量子产率的计算
点击 QY 选项，
1）选择datawithout sample 选择间接无样品数据，load，
选择data withsample 选择间接有样品数据，load
点击start, 移到对应的区域，点击右键，选择范围，读数，
对于瑞利散射峰（λem = λex），只选择瑞利峰，对于发射峰只选择发射
计算，得到internalQY值和externalQY值。
2）选择直接激发无样品数据load，选择直接激发有样品，无需选择，直接计算，得到internalQY值和externalQY值，最重要的时吸收值absorptance，然后通过下列公式计算得到QY值：
内量子产率：
Φ = Φ_d-(1-Abs)Φ_i
Φ_d_：直接激发有样品；Φ_i_：间接激发有样品