【求助】请教关于碱性橙2号的检测方法

中国卫生检验杂志2OO4年2月第l4卷第1期Chinese Journal of Health I~boratory Technology 2OO4．Februa~．14．No．1
[文章编号]1004-8685(2004)01—59．02
[中图分类号]R155．5 1
RP—HPLC法测定染色黄鱼中的碱性橙含量
铁晓威，黄百芬，任一平
(浙江省疾病预防控制中心，杭州310009)
[文献标识码]A
碱性橙(Basic Orange 1I)是一种偶氮类碱性染料，俗名”王
金黄”，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色。根据美
国卫生研究所(NIH)化学品健康与安全数据库资料表明：摄
取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤
害 一。有确凿的动物实验数据表明，该物质为致癌物 ，在接
触该物质时需使用无孔手套和呼吸面罩，以免对人体造成伤
害。根据《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》(GB
2760)及《中华人民共和国食品卫生法》的相关规定，为禁止用
作食品添加剂的化学制品。由于碱性橙比其它水溶性染料如
柠檬黄、日落黄等更易于在鲜海鱼上染色且不易褪色，因此一
些不法商贩用碱性橙对黄鱼进行染色，以次充好，以假冒真。
欺骗损害消费者，危害消费者的身体健康。
目前国内尚无成熟的测定食品中碱性橙残留的方法，作
者建立了RP—HPLC法测定染色黄鱼中碱性橙残留的方法，取
得了满意的效果。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂美国BECKMAN SYSTEM GOLJ)高效液相色
谱仪(126高压溶剂泵，166紫外一可见光检测器，508自动进样
器)，32Karat色谱工作站，均质机，旋转蒸发仪，超声波振荡器，
离心机，碱性橙标样购自美国Sigma公司，甲醇为色谱纯，水为
重蒸水，其它试剂均为分析纯。
1．2 色谱条件色谱柱：汉邦Lichrospher C18(dp5 4．6tumiD
×150n~)；流动相：甲醇一20mmol／L乙酸铵(印：40)；流速：
1．0ml／min；检测波长449nm，柱温：室温，进样量：2oeJ。
1．3 测定步骤按GB将黄鱼样品去骨去内脏，用均质机均
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【测定方法】
质，准确称取均质后样品20．00g于200ml烧杯中，加入20g无
水硫酸钠搅拌均匀，加入50Tnl无水乙醇超声波提取15min，用
50ml无水乙醇再提取一次，合并两次的提取液，过无水硫酸钠
柱脱水。于70~C真空浓缩至干，加入1．0ml水，混匀后移入离
心管中20000r／min离心5Inin，取下层水相经0．45t~n的膜过滤
后进样分析。
2 结果与讨论
2．1 吸收波长的选择取适量标样用无水乙醇制成20t,g／ml
的溶液，在190nm一600Bin的波长范围内进行扫描，结果碱性
橙kmax=449nm(图1)。
2．2 流动相的选择
2．2．1 甲醇含量对保留时间的影响 用20mmol／L乙酸铵和
甲醇按一定比例?昆合考察不同配比对保留时间的影响(图2)。
2．1．2 流动相pH对保留时间的影响 固定甲醇比例为60％
(v／v)用乙酸和1M的氢氧化钠调节20mmol／L乙酸铵的pH
值，考察不同流动相pH对保留时间的影响(图3)。
2．2 标准曲线绘制准确称取碱性橙标样0．1000g用无水乙
醇溶解并定容到100m]，分别量取此液(碱性橙浓度为1．0me／
ITI)适量，用无水乙醇稀释成浓度分别为0．39、0．78、1．56、3．12、
6．25、12．50、25．00、50．00、100．00,~／ml的溶液，分别进样20 ，
记录色谱图和峰面积，以峰面积为横坐标，以碱性橙浓度为纵
坐标作图(图4)。
得线性方程为：Y=1．38646×10—5X+0．00694053，r=0．
9999
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表4 样品A测定结果
亟目 吸光度 含量( ) 回收率(％)
由表4、表5可知应用本方法对于样品A、B测定的标准偏
差分别为1．o7％和0．94％，加标平均回收率可达99．5％，可以
满足日常检测的需求。
3 结论
本方法常温下(25cc)即可快速显色(15min)并可稳定
25min，有利于日常快速分析。
本方法的实验过程中无须通过加弱酸，弱碱调节，DH可达
5．7—5．8，为适宜的显色条件。
通过实验验证，本方法可排除实验过程中样品溶液变浑
浊，无法比色的问题，可大大提高实际工作的效率。
参考文献
[1]杨惠芬，李明元，沈文，等．食品卫生理化检验标准手册．中国标
准出版社，1997．
[2]中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所．车间空气监测检
验方法[M]．北京：人民卫生出版社，1990．
[3]中华人民共和国卫生部卫生法制与监督司．生活饮用水卫生规范，
2001．6．
(收稿日期：2003-08—2o)
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图1 碱性橙的吸收光谱图
甲醇含景【％ ，v／v)
图2 不同流动相配比对保留时间的影响
流动相pH
图3 流动相pH对保留时间的影响
图4 标准曲线
2．3 最低栓出限将表样逐级稀释至峰高为基线噪音的
三倍，该浓度为最低检出浓度。结果为0．1 ml，以取样20．
00g最后定容到l rnl计，最低检出限为5 ks。
2．4 精密度试验按测定方法测定同一染色黄鱼样品6次。
记录测定浓度，RSD为3．85％
表1 精密度试验
2．5 加标回收试验取一已知含量的样品，分成三份加入同
等含量的标准进行处理进样分析。所得结果如下：
表2 加标回收试验
2．6 干扰性试验用同样的色谱条件对柠檬黄、日落黄标样
进行分离对结果无影响(图5)。
暑
图5 干扰试验
2．7 样品分离图谱(图6)
T im e：9．87884 M inutes．Am plltud~：0．000378
薯
O．O6
O。O4
O．O2
O．OO
暮
图6 染色黄鱼分离图谱
综上所述本方法精密度高，回收率好，在0．4一l0o．0vg／~
的浓度范围内线性关系良好，具有较高的灵敏度。对市场上
染色黄鱼的卫生监督具有较好的判定依据。
参考文献
l1 J NTP CHEMICAL REPOSITORY C．I．BASIC ORANGE 2．
[2 J International Agency for Research on Cancer，World Health Organization． I
ARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk of Chemicals to
Man．International Agency for Research on Calleer． Geneva，1971—1982．
8：9l一96
(收稿日期：2003-09—20)
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