【原创】我用ZEISS激光共聚焦显微镜拍的3D图片

个人认为需要反映亮暗细节的图用灰图有真实感,用伪彩当然可以突出变化.
而反映高度的图, 并不在意图上灰度细节的,不妨用伪彩表示.
假设样品表面一点是红色, 用408波长的光扫描将会如何, 反射光特弱.样品是否就成了黑洞一个?

就材料领域而言，
Olympus关于噪声的控制比较简单，也比较好，而且除了灰度，伪彩之外，还提供将原来的金相纹理附在3D图像表面，这个功能我在ZEISS上没有发现。







而ZEISS的共聚焦是基于生物基础上的，说明书上的噪声控制都是有关激光和荧光的，软件提供了 Detector Gain 和 Amplifier Offset对亮度以及曝光度进行控制，俗称“红蓝”调节。但事实上这种调节非常的麻烦，而且效果也不太好。可能是我个人的技术不到位吧，总会有噪点，头疼！呵呵

另外我的ZEISS的激光波长为488nm， Olympus的为408nm， 激光可能对分辩能力也会有所影响。

在ZEISS的镜子上，如果反射光过强，显示红色，3D图像为一个高原平面；如果反射光过弱，显示蓝色，3D图像显示为一个无底洞。所以为了避免这些信息失真，红蓝调节时我们尽量不让出现红色和蓝色，或只出现一点点。据我的经验，这种做法应该是针对生物材料，而对于反光性很强的金属材料以及非常粗糙的表面，实际中很难调节。

不知道其它牌子的共聚焦在这点上是怎么把握的？

也请Olympus兄谈谈Olympus共聚焦显微镜在这方面的经验。谢谢！

材料样品不同于荧光样品, 强光不会造成样品淬灭, 对暗样品不妨提高激光到适当强度可以避免PMT噪声. 而出现蓝色点的方法值得商榷, 因为您并不需要象荧光一样消除背底的影响, 如果增加一点Offset提高背底可能更好.同时, 由于样品的大反差, 出现红色也是有问题的操作. 扫描时用12Bit或更高采样来取图,然后在处理处用自动对比度展宽层次可能更适合.
488波长在蓝色区域, 如果不是固体激光的话通常是Ar离子激光器, 同时应该有458, 514波长可用, 对不同颜色的样品不妨采用最大反射的波长扫描.
405波长接近可见光极限, 不知厂商提供的物镜有无做过补偿, 不然扫描平面与观察平面有层差, 扫均匀面时还会出现中间亮周围暗的情况, 只能用小视野来弥补. 是提高一点分辨率, 可能损失更大.
以上是自己一点看法, 有机器的不妨试一下.

仔细拜读了leicafans兄的回复。
我的激光确是Ar离子激光器，不过好像只有488nm可选，如果可选458nm的话，我觉得ZEISS的客服应该会告诉我的，我再问问；
我扫描时一般用Standby状态，然后用20%的Transmission，这样的激光强度不知够不够，或者说激光的强度对扫描质量有什么影响？
很遗憾的是每次我的offset都已经调到0.1了（最大的了），这个据说跟pinhole有关系，但总觉得有点问题。

大激光, 小Gain

哈哈，我试试。谢先。

408nm波长以下的激光多采用光电倍增管作为激发光源,其缺陷便是具有极大的不稳定性,因此此光源的工作功率往往很大而输出功率却很下,就是因为采用了极大的过滤功能.采用Ar激光和HeNe激光虽然波长有所增大,但其扫描过程中的波长稳定,扫描躁声很小,有更高的图像可靠性.