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90残基的15N标记蛋白想测结构，请好心人指点

vocter

2020/01/14

15N标记蛋白做三维实验前应做哪些实验准备
本人以前是做多肽结构的，现有一90残基的15N标记蛋白想测结构，有些问题想请教做过的各位大师，请好心人指点，谢谢！
问题1：核磁共振前期准备工作应做哪些？我现在知道的有以下几个，不知是否必要，
1. 蛋白样品的1H90度（是否需要用zgpr压水）
2.15N的90度
3.1H-15N HSQC（是否必须？）
问题2：只是15N标记，要测的三维实验有哪些，我知道的有：15N-TOCSY,15N-NOESY,不知是否还需测HNHA,HNHB,我用CYANA算结构
问题3：我的样品浓度能到1.5mM，不知ns设多少合适，一个三维实验大概需要多长时间?

wuruiqiqi

第1楼2020/01/14

问题1：
1）是
2）是
3）是
问题2，只有15N，1H的信息算结构有些困难。不过前不久有篇JACS paper直接用NOE预测3D结构。
问题3，这个浓度不错，你的蛋白也不大，大概一、两天，根据你的仪器而定。

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