紫外分光光度法用于混合粉末API含量的测定

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2020/09/17
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私聊

近红外光谱（NIR）

紫外分光光度法用于混合粉末API含量的测定

试剂

对乙酰氨基酚（山东昌达生物科技有限公司）；微晶纤维素（安徽山河药用辅料股份有限公司）；玉米淀粉（山东聊城华阳医药辅料有限公司；北京闵松经贸有限公司）；一水合乳糖（镇江市康富生物工程有限公司）；氢氧化钠（上海艾览化工科技有限公司）；羟丙基甲基纤维素（安徽山河药用辅料股份有限公司）；去离子水。

仪器和软件

LGL 002实验型流化床（山东新马制药装备有限公司）；Micro NIR PAT-U 微型近红外光谱仪（美国Viavi Solutions公司）；紫外分光光度计；烘箱；分析天平；干燥器orign85（美国OriginLab公司）。

每个混合批次按经验预混合5 min至基本均匀后再混合约10 min，此时进行取样，每次取样约为3 g。64个校正集批次共收集64个样品，用于静态光谱采集、含水量和一级数据API含量的测定。水分含量的测定采用药典规定的干燥失重法(LOD)，在烘箱中完成，API含量采用紫外分光光度计测得。具体方法为[40]：首先配置浓度为5-15 μg/mL的一系列API的标准溶液，在特定波长(257 nm)下测定吸光度，生成API溶液吸光度与浓度之间的标准曲线。浓度8.448 μg/mL下的标准溶液，平行制备6份用于考察该方法的重复性；其中一份供试液重复测定6次吸光度，用于考察仪器的精密度；两天内不同人员对6份8.448 μg/mL浓度下的溶液进行紫外吸光度的测量，对方法的精密度进行了评估。标准曲线的线性用R2来判定。同样的方法配置取样所得样品的溶液并测定其吸光度并带入标准曲线中计算相应的API绝对含量，再减去样品的含水量，从而计算出API的实际相对含量。

一级数据分析结果

表为仪器精密度实验结果是在短时间内由同一测试人员将同一样品进行紫外吸光度测定，检查仪器的精密度。表2为同一人员对同一浓度下的不同样品进行测定，检查该方法的重复性。表3为不同人员在不同的日期内对同一浓度的不同样品进行测定，用于检查该方法的精密度。表4为API标准溶液紫外吸光度测量结果，共配置了7个浓度下的标准溶液，得到7个相应的吸光度均值，对标准溶液的浓度和相应的紫外吸光度进行回归，标准曲线如图.由以上方法学考察结果可得仪器的精密度(RSD=0.10%)，方法的重复性(RSD=0.52%)，方法的精密度(RSD=0.59%)，RSD均小于2%，且R2为0.9998，线性良好，证明该方法可以用于API含量一级数据的测定。

表1 仪器精密度实验结果

人员	浓度 (μg/mL)	吸光度						均值	RSD (%)
1	8.448	0.2462	0.2466	0.2468	0.2464	0.2467	0.2468	0.2466	0.10

表2方法重复性实验结果

人员	浓度 (μg/mL)	吸光度						均值	RSD (%)
1	8.448	0.2466	0.2473	0.2454	0.2447	0.2482	0.2458	0.2463	0.52

表3 方法精密度实验结果

人员	浓度 (μg/mL)	吸光度						均值	RSD (%)
1	8.448	0.2466	0.2473	0.2454	0.2447	0.2482	0.2458	0.2462	0.59
2	8.448	0.2448	0.2479	0.2464	0.2452	0.2482	0.2440	0.2462	0.59

表4 API标准溶液浓度-吸光度值

序号	标准溶液浓度 (μg/mL)	吸光度			均值
1	11.264	0.1624	0.1626	0.1638	0.1629
2	14.080	0.2036	0.2048	0.2040	0.2041
3	16.896	0.2462	0.2466	0.2468	0.2465
4	19.712	0.2882	0.2878	0.2884	0.2881
5	22.528	0.3276	0.3280	0.3280	0.3279
6	25.344	0.3660	0.3668	0.3668	0.3665
7	28.160	0.4102	0.4102	0.4108	0.4104

图1 标准溶液浓度-吸光度直线回归图

根据图1建立的标准曲线，通过实际测得的样品紫外吸光度计算得到相应的样品溶液浓度，从而计算出所取样品中API的相对含量。含量范围如表5所示。从表5计算结果可以得，通过标准曲线计算得到的API相对含量的均值较理论含量偏高，这可能是由于混合过程中辅料吸附性大于API而黏附到流化床滤袋上造成的系统误差所致。除100%水平下的最大值以外，每个理论含量水平下的极值均在理论含量±5%以内。另外，每个理论含量水平下的所有样品的RSD值均小于5%。表示一级数据测量结果的精密度良好，在95%置信区间内几乎无异常值，可以参与建模。

表5 API含量一级数据测定分析结果