氨基柱反相使用，对水相的比列有要求吗

应助工程师

氨基柱的使用注意事项：
说明： .氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈（ 99 ： 1）中。而我们做糖分析是用反相流动相，所以要先用异丙醇过渡。
反相使用
1 先用异丙醇冲洗管路（此时不接色谱柱）；然后接上色谱柱，以低流速（ 0.1ml/min ）用30 倍柱体积的异丙醇过渡(差不多一夜) 。（必须用异丙醇过渡，否则会发生乳化现象， 导致色谱柱使用效果变差。）
2 再换成流动相，流动相平衡时间要长一些（为以后色谱柱的稳定打好基础）。
3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH 值时要精密到0.1 。
4 反相条件下使用时，要特别注意控制pH 值范围， pH 值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH 范围在pH3.0-7.0
5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类， 建议在用分析流动相之前， 先用80% 水做流动相
过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
色谱柱的冲洗：
乙腈：水（ 95 ：5 ） ，过渡到乙腈：水（ 50 ：50 ），最后保存在乙腈：水（ 95：5）中。
色谱柱的保存
反相使用时， 如短期不用， 可用95% 甲醇或乙腈保存； 长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。
再生：
再生方案1：NH2 柱用于反相条件时， NH2 键会水解，尤其是在该柱子pH 范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10 倍柱体积溶液冲洗，如下：
先用5-10 倍的柱体积的含0.5-1.0 ％NH3 的乙腈-水(50:50) 溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），
再进行下面操作：
95 ％水/5 ％乙腈THF 四氢呋喃95 ％乙腈/5 ％水并保持95 ％乙腈/5 ％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。（此方法很多人尝
试）
再生方案2：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10 倍柱体积的下列溶液冲洗：95 ％水/5 ％乙腈THF 四氢呋喃
95 ％乙腈/5 ％水再走流动相即可
氨基柱的活化
方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min 的流速， 20 倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
6.2
方案2： NH2 柱用于反相条件时， NH2 键会水解，尤其是在该柱子pH 范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10 倍柱体积溶液冲洗，如下： 95 ％水/5％乙腈THF 四氢呋喃95 ％乙腈/5 ％水并保持95 ％乙腈/5 ％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。
6.3
方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10 倍柱体积的下列溶液冲洗：
95 ％水/5 ％乙腈THF 四氢呋喃95 ％乙腈/5 ％水
再走流动相即可