液相用甲醇冲洗后压力变大

应助达人

首先检查下是不是哪部分有堵塞的情况，是柱子还是其他？不连柱子看看是不是压力正常就可以排查；如果是色谱柱的问题，可以反冲一下；样品一定要保证前处理干净，进柱子之前过滤膜。

连上色谱柱是33MPa，不连色谱柱是3MPa左右，我用纯水：纯甲醇=90%：10%低流速洗了一晚上，感觉柱压稍微降低了些

应助达人

既然是前处理没做好，那有很大的可能就是柱头筛板堵了。
将进样端柱头慢慢拆下来，注意不锈钢筛板，是卡在柱子上？还是在柱头螺母内，仔细取下即可。然后用30%硝酸超声清洗10分钟，再用纯水置换干净，再仔细装上就行。
如果改善不大，那就是柱内填料吸附了脏东西堵了，这个需要用另外不同组合的溶剂去冲洗，你先把柱头处理一下试试，后面看情况再说。

应助达人

前处理一定要彻底，如果是沉淀蛋白，甲醇或乙腈的量一定要足够。进样前最好离心取上清再进样。
色谱柱堵住的话，只能先用90%水相以0.1流速冲一夜，等压力降下来再换大流速，再用90%有机相冲。

谢谢你的回复，我反冲柱子了，现在95的甲醇，压力3.7MPa，不知道这是不是表明已经冲出脏东西了，没连接检测端

谢谢回复。

我昨天反冲了柱子，不接检测端的话压力下来了，可接上检测端检测的时候压力又飙上去了……哭死，我怀疑是不是管路堵了，我第一次做液相实验，机器还是借其他实验室的……

应助达人

反冲柱子，不接检测器有多高？接上检测器压力有多高？
接上检测器高，无非就是流通池入口，流通池，流通池出口。做一下分段排查，就能确定出来，压差有多大，是哪里堵了。
反馈问题一定提供有用的信息，关键的信息，能量化，图形化是最好的。

反冲柱子不接检测器，95%纯甲醇，0.2ml/min，压力3.7；柱子同样反着接，接上检测器，相同流速下压力是10；取下柱子，换成两通，把两端连接起来，其他条件不变，压力是1.3。