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岛津8050液质测分析物信号逐渐降低，内标却稳定

Ins_8c583c07

2021/05/19

液质联用（LCMS）

求助各位大佬，我在做gilteritinib血浆浓度的液质方法验证，方法在三个月前已经确立了，但是一个月前开始出现响应不稳定的问题，现在用不添加血浆的纯溶液进行测试。

仪器：岛津8050

样品制备：gilteritinib溶于DMSO制成储备液，用甲醇稀释成二级储备液，再用50%的甲醇稀释成工作液，取10微升工作液加入90微升50%甲醇（代替空白血浆），加入400微升含内标（ibrutinib）的乙腈，再用水稀释两倍进样。

流动相：0.1%甲酸水(A)，乙腈(B)

流动相梯度：0-0.5 min 18%B

1.4 min 50%B

1.6 min. 90%B

1.6-3.0 min 90%B

3.1-4.0 min 18%B

柱子：Acquity BEH C18 (2.1mm*50mm, 1.7) ，流速0.5mL/min，gilteritinib大约1.2分钟左右出峰，内标1.7分钟出峰

问题；同一样品连续进样，响应逐渐下降，5针后响应为第一针的一半，与方法开发时相比，只有最初响应的十分之一；而内标响应却很稳定，从未有过下降的问题。

连续进针后，平衡一段时间（20分钟左右）再测定，响应稍微上升，但之后又开始逐渐下降。

测试过几天前同浓度样品，以及几个月前同浓度样品，和新配的样品相比，响应值相似但一样很低，应该不是样品自身降解的问题。换了玻璃进样瓶也未得到改善，排除进样瓶的吸附问题。

其他人测别的物质未见异常，仪器液经过调谐和灵敏度检测，没有发现问题，仪器噪音本地也很小。流动相和溶剂都换了，不管是溶于不同比例的乙腈还是甲醇，或是添加甲酸都没有改变。

仪器参数也都正常，液相方面柱压稳定，未见异常，重新优化质谱条件也没有改善。

现在的情况看来，测别的物质都正常，质谱和液相应该没啥问题，是这个化合物的物性特殊吗？不明白为什么方法开发的时候好好的，现在却出现问题。考虑过分析时间短，可能没平衡好，又把出峰后的平衡时间延长了两分钟，甚至直接走等度，还是没有改善。之前出现过一两次响应下降，大概一两天左右又恢复正常，现在是连续两周都没有恢复，该排查的也排查了，还是不知道什么原因。测定gilteritinib的文献比较少，但用的条件也都是常规条件，没有特殊处理，在论坛上苦苦搜了好几天的帖子，该试的也试了，都没有解决，求助各位大佬能给我一些建议，万分感谢了！

分
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小精钢

第1楼2021/05/19

测试别的物质正常，测试这个物质不正常？放图谱看下嘛，如果测试别的物质正常，测试它不正常，说明仪器没问题。你这问题比较奇特，清洗下你的DL管和ESI离子源，柱子也检查下，查一下，你这种物质是否热分解或与什么会反映。把谱图放出来

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Ins_8c583c07

第2楼2021/05/19

谢谢你的建议，谱图好像也没什么异常，只是单纯的峰面积比原来小很多??

这个药是新型的抗癌药物，感觉稳定性应该还可以吧，没见有什么特殊报道。。

小精钢(Insm_e46b3320) 发表:测试别的物质正常，测试这个物质不正常？放图谱看下嘛，如果测试别的物质正常，测试它不正常，说明仪器没问题。你这问题比较奇特，清洗下你的DL管和ESI离子源，柱子也检查下，查一下，你这种物质是否热分解或与什么会反映。把谱图放出来

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Ins_8c583c07

第3楼2021/05/19

说到清洗问题，其实我是在日本的实验室里，只有一个日本人和我会用质谱，质谱是他负责的，不可能让我随便拆卸清洗什么的，我只能简单的擦一下源。。。跟他反应过响应问题，他跟我探讨过几次之后，发邮件给我的上级说我严重影响了他的研究，让我不要再问他问题了。。。之前和他讨论的时候，他认为他测的物质都没问题，仪器灵敏度也没问题，仪器也不脏，觉得我应该好好研究一下物质的性质。。。我实在不知道该怎么办了，如果要清洗的话我肯定需要确凿的证据说就是因为仪器脏了，然后跟我上级反应，再让我上级和他沟通，请他清洗，但我觉得他咬定仪器没问题的话，仪器是洗不了的。。。

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sdlzkw007

第4楼2021/05/19

应助达人

根据结构来看，此药物稳定性有待验证

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Ins_8c583c07

第6楼2021/05/19

谢谢您，我不是很懂药物结构这方面的，您能稍微提示我一下吗，或者说开发这个药物的液质方法不太现实？我看已经有液质方法和液相方法发表了，都没有关于稳定性方面的讨论
sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:根据结构来看，此药物稳定性有待验证

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sdlzkw007

第7楼2021/05/19

应助达人

你可以从质谱得到的质量碎片反推计算出原来的分子结构断裂的可能规律以及涉及到的气态（真空）反应产物，最重要的是系统学习一下质谱的理论知识。比如氮规则，麦氏重排，还有空间结构对于离子化的影响。
Ins_8c583c07(Ins_8c583c07) 发表: 谢谢您，我不是很懂药物结构这方面的，您能稍微提示我一下吗，或者说开发这个药物的液质方法不太现实？我看已经有液质方法和液相方法发表了，都没有关于稳定性方面的讨论

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Ins_8c583c07

第8楼2021/05/19

嗯嗯，太谢谢了，我去好好查一查。最后再请教您一下，是要从找到更稳定的离子碎片入手是吗
sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:你可以从质谱得到的质量碎片反推计算出原来的分子结构断裂的可能规律以及涉及到的气态（真空）反应产物，最重要的是系统学习一下质谱的理论知识。比如氮规则，麦氏重排，还有空间结构对于离子化的影响。

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sdlzkw007

第9楼2021/05/19

应助达人

在排除干扰的情况下，选择响应高并且稳定的质量碎片是方法验证的重要研究方向。
Ins_8c583c07(Ins_8c583c07) 发表:嗯嗯，太谢谢了，我去好好查一查。最后再请教您一下，是要从找到更稳定的离子碎片入手是吗

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Ins_8c583c07

第10楼2021/05/19

好的，非常感谢！
sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:在排除干扰的情况下，选择响应高并且稳定的质量碎片是方法验证的重要研究方向。

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hujiangtao

第11楼2021/05/19

应助达人

别的物质没问题说明质谱没问题，可能这种物质不稳定或者所选择的离子对不稳定，可以试试换离子对

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