高效液相色谱法测定土壤中的邻、间、对氨基苯磺酸

memory光阴

2021/10/08
菜鸟分析队

私聊

液相色谱（LC）

1.实验部分

1.1标品试剂与耗材

甲醇（99.9%，HPLC级，北京百灵威公司）；超纯水（经空白验证无干扰）；邻、间、对氨基苯磺酸（5g，≥99.0%，上海安谱）；碳酸钠（HPLC级，≥99.5%，上海安谱）；碳酸钠溶液（10Mm，准确称取1.0598g碳酸钠于烧杯中，加水溶解后定量转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度）；IC Guard C18萃取小柱（1mL，上海安谱）；一次性注射器（实验用10mL，上海安谱）； PTFE亲水型滤头（0.45μm，上海安谱）；棕色进样瓶（2mL，上海安谱）。

1.2仪器与设备

高效液相色谱仪（1260 infinity Ⅱ ，配备DAD/FLD检测器，美国安捷伦）；MetroSep A Supp 5色谱柱（4.0×150mm，5μm，瑞士万通）；超声波清洗机（DL-360E，上海之信仪器有限公司）；台式高速离心机（H3-18K，湖南可成仪器有限公司）。

1.3校准曲线的绘制

配制浓度为1000mg/L的氨基苯磺酸混合标准储备液，从中移取5mL于50mL容量瓶中，用甲醇-水混合溶液（1+1）稀释并定容得到浓度为100mg/L的氨基苯磺酸混合标准使用液。分别移取上述氨基苯磺酸混合标准使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL至6个50ml容量瓶中，用甲醇-水（1+1）定容，最终得到浓度为0.2mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的校准曲线系列。

1.4仪器分析条件

流动相：A:10mM碳酸钠溶液 B: 水；梯度洗脱：0-11min：65%A+35%B,11-16min：50%A+50%B；流动相流速：0.6mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL；检测波长：244nm。

注：RT-8.484min（对氨基苯磺酸）；RT-9.360min（间氨基苯磺酸）；；RT-12.652min（邻氨基苯磺酸）

1.5样品提取与净化

准确称取5.0g（精确至0.001g）经风干研磨过筛的土壤样品于50mL螺旋盖PP离心管中，准确加入25mL 1+1甲醇，旋紧盖子，用漩涡混合器混匀后，置于超声清洗机中超声提取10min，再重复混匀和超声提取1次，即总共超声提取20min。将离心管置于离心机上，4000r/min离心10min，取适量上清液过0.45μm亲水PTFE滤头后，待净化。

本方法采用C18固相萃取小柱净化去除杂质干扰。取固相萃取小柱，依次用注射器将5mL甲醇，10mL超纯水过柱，活化，然后放置10min使之充分平衡。用注射器将样品液推过柱，流速4mL/min，使用时柱体需垂直。前3mL过柱的样液需弃置，收集之后的样液，待测定。

2.参数验证

2.1检出限的验证

本实验的方法检出限验证采用石英砂加标的方法确定方法检出限。称取石英砂5.0g，加标后浓度约0.5mg/kg(加标量100ug)；按照样品分析步骤平行测定7次，计算标准偏差S，检出限MDL=3.143×S。

检出限（mg/kg）	1	2	3	4	5	6	7	平均值	相对偏差SD	检出限MDL
对氨基苯磺酸	0.405	0.405	0.41	0.375	0.385	0.385	0.420	0.398	0.0151	0.047
间氨基苯磺酸	0.490	0.515	0.465	0.475	0.465	0.475	0.485	0.481	0.0162	0.051
邻氨基苯磺酸	0.445	0.495	0.425	0.490	0.450	0.455	0.435	0.456	0.0246	0.077

2.2准确度与精密度

分别对5.0g石英砂进行低、中、高三种不同浓度加标，加标浓度分别为2mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，每个浓度分别测定6次，测定结果如下：

检出限（mg/kg）	1	2	3	4	5	6	平均值	相对偏差SD	相对标准偏差RSD	回收率Rec%
对氨基苯磺酸	1.67	1.70	1.68	1.69	1.68	1.60	1.67	0.04	2.2	79.8~85.0
间氨基苯磺酸	1.81	1.88	1.88	1.88	1.77	1.67	1.81	0.08	4.6	83.5~94.0
邻氨基苯磺酸	1.97	1.74	1.62	1.82	2.01	1.67	1.80	0.16	8.9	80.8~100
检出限（mg/kg）	1	2	3	4	5	6	平均值	相对偏差SD	相对标准偏差RSD	回收率Rec%
对氨基苯磺酸	9.62	9.61	9.48	9.62	9.57	8.78	9.45	0.33	3.5	87.8~96.2
间氨基苯磺酸	9.92	9.69	9.52	9.79	9.73	8.88	9.59	0.37	3.9	88.8~99.2
邻氨基苯磺酸	10.4	10.9	10.4	10.3	10.3	9.11	10.2	0.60	5.9	91.1~109
检出限（mg/kg）	1	2	3	4	5	6	平均值	相对偏差SD	相对标准偏差RSD	回收率Rec%
对氨基苯磺酸	19.8	20.1	19.8	20.0	19.9	19.7	19.9	0.14	0.7	98.6~101
间氨基苯磺酸	19.9	21.2	20.0	20.2	20.4	20.1	20.3	0.47	2.3	99.6~106
邻氨基苯磺酸	20.7	20.3	19.6	21.0	20.7	20.8	20.5	0.50	2.5	98.0~105

2.3 线性关系

分别移取浓度为100mg/L的氨基苯磺酸混合标准使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL至6个50ml容量瓶中，用甲醇-水（1+1）定容，最终得到浓度为0.2mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的校准曲线系列

化合物	校正曲线方程式	相关系数（R2）
对氨基苯磺酸	Y=140.0643x	0.9999
间氨基苯磺酸	Y=63.4278x	0.9999
邻氨基苯磺酸	Y=66.5575x	0.9999