JOE HUI
第2楼2022/07/25
楼主,可以参考如下信息:
选择C18色谱柱时应注意:
1)在pH值正常范围内(2~8)可选用现代高纯硅胶色谱柱,具有峰形好,重现性高和寿命长的特点,选用较短的柱子可以提高分离效率,选用较长的柱子可以增加保留,选用小颗粒度的填料可以提高分离度,对分子量大的组分宜选用大孔径填料的色谱柱。
2)分离极性大的组分(流动相水相过大)采用AQ类似的色谱柱。
3)分离生物碱类的化合物选用经过烷基化处理封口的填料可防止碱性化合物的拖尾现象。
4)极端酸性条件下(pH小于2)选用Zorbax Stable Bond C18类色谱柱或者宽pH值色谱柱。
5)低端碱性条件下(pH大于8)选用Zorbax Extend-C18、XBridge,XSelect,Atlantis,Symmetry,XTerra,SunFire等色谱柱。
6)选用含碳量高的柱子可以增加保留。
wuyuzegang
第3楼2022/07/25
在色谱固定相的选择和使用中,最常用的键合相类型是十八烷基硅烷键合硅胶(C18)。不过,由于固定相物理特性与化学修饰的差异,使得不同的 C18 选择性不尽相同。选择色谱柱时,如果一种类型的 C18 柱分离度不足,就可以选择与之选择性差异较大的 C18 柱来进行优化。
以 Agilent InfinityLab Poroshell 系列中的 C18 液相色谱柱为例:
Poroshell 120 EC-C18 为封端的碳十八固定相,对酸性、碱性、中性化合物都有良好的选择性,已经成为方法开发的首选,也是在 Agilent 1260 Infinity II 四元泵液相色谱系统中标配的色谱柱。
与 EC-C18 柱不同,Poroshell 120 SB-C18 柱却是不封端的碳十八固定相。由于裸漏的硅醇基存在,可与待分离物发生氢键、离子间作用等,因此 SB-C18 的选择性与封端的 C18 柱存在显著差异。可以利用这个特点,在方法开发时 SB-C18 和 EC-C18 通常可以作为方法开发的起始色谱柱。另外,SB 的全称是 StableBond,顾名思义意为“稳定的键合相”,这里说的稳定,主要是在C18硅烷长链的两侧采用异丁基进行立体的保护,使得 SB-C18 在低 pH 下有较好的耐受性能。
同样采用 Poroshell 120 的硅胶,HPH-C18 与 EC-C18 和 SB-C18 又有所不同。在进行键合之前,在 Poroshell 硅胶的表面多孔层,先进行了有机杂化处理,再进行 C18 键合和封端修饰,得到的 HPH-C18 色谱柱具有了高 pH 耐受的特点。
因此,表面化学结构的差异,三种常用的 Poroshell C18 柱,在选择性上具有显著区别。表 1列出了以 EC-C18 为基准,HPH-C18 与 SB-C18 的相似度因子 Fs。当 Fs 因子大于 3.0时,固定相选择性存在差异。
表 1. 三种固定相选择性差异比较(以 EC-C18 为基准)