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酸枣仁提取工艺优化

  • 锦锦添花
    2022/09/01
  • 私聊

中药/天然药检测

  • 1 酸枣仁中总皂苷和总黄酮定量分析方法的建立

    酸枣仁总皂苷定量分析方法的建立

    取酸枣仁皂苷A对照品和样品液适量具塞试管,挥干溶剂,加入新鲜配置的5 %香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL,加塞,60 水浴中反应15 min,取出,冷却至室温,加5 mL冰醋酸,摇匀,外标两点法于592 nm下测定吸光度,计算含量。

    酸枣仁总黄酮定量分析方法的建立

    取芦丁对照品和样品液适量25 mL量瓶中,加入浓度为0.2 moL· L-1的三氯化铝溶液2.5 mL,再加浓度为1 moL· L-1的醋酸钾溶液5.0 mL,用水定容至25 mL,外标两点法272 nm处测定吸光度计算含量。

    2 溶液的制备

    对照品溶液的制备


    取酸枣仁皂苷A对照品适量,精密称定,置5 mL量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.45 mg · mL-1酸枣仁皂苷A对照品储备液

    取芦丁对照品适量,精密称定,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.19 mg · mL-1芦丁对照品储备液

    供试品溶液的制备

    称取酸枣仁药材约15 g,精密称定,置圆底烧瓶中,石油醚回流提取2次,每次2 h,弃去石油醚,挥干药渣,根据正交设计的工艺采用加热回流提取,放冷至室温,提取液过滤,润洗残渣,合并滤液,蒸干溶剂,残渣全部转移至50 mL量瓶中,用70 %乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。

    3 标准曲线的绘制

    酸枣仁总皂苷标准曲线

    精密量取酸枣仁皂苷A对照品溶液00.10.20.40.61.0 mL,按“1”项下 “置具塞试管中”中操作,在595 nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,质量为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程为 Y =1.992X - 0.0002r = 0.9998,线性范围为45.0 450.0μg

    酸枣仁总黄酮标准曲线

    精密量取芦丁对照品溶液00.10.20.40.60.8 mL分别25 mL量瓶中,按“1”项下“加入浓度为0.2 moL· L-1的三氯化铝溶液”操作272 nm处测定吸光度以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。得到回归方程为Y = 0.2255 X +0.0003r = 0.9997,线性范围为0.76 6.08 μg

    4提取工艺参数的优化

    正交试验设计


    在确定提取方法和提取溶剂的基础上,选取主要影响提取效率的因素:溶剂倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(C),每个因素选择3个水平,按L934)正交表安排实验(表2-1)。以溶液中总黄酮和总皂苷含量为考察指标,通过多指标综合评分法,全面分析,筛选最佳提取工艺参数。

    Levels

    Quant. of solvent

    Extrn. Duration·h-1

    Extrn. time

    1

    6

    1.0

    1

    2

    8

    1.5

    2

    3

    10

    2

    3

    Table 2-1. The factors and levels selected



    正交试验结果

    以酸枣仁中总皂苷和总黄酮含量为指标,进行多指标综合评分,评分时以各指标最大值为参照将数据进行归一化,给出不同的权重系数。因总皂苷和总黄酮是酸枣仁药材的主要活性成分,且两因素对综合评分的数值贡献相同,故将总皂苷和总黄酮权重系数各定为0.5

    综合评分(Y=0.5 ×(总皂苷含量/最大值× 100 + 0.5 × (总黄酮含量/最大值) × 100。以综合值进行统计分析,直观分析见表2-2,方差分析见表2-3

    由直观分析结果(表2-2)和方差分析结果(表2-3)可见,以综合评分为标准,在所选因素水平范围内,影响其提取效率各因素的主次关系为:CAB,即提取次数对提取过程有显著影响,溶剂倍量影响较小,提取时间影响最小。故最佳提取工艺为A2B3C3,即8倍量70%乙醇提取3,每次2 h

    Table 2-2. Resultof L9(34)orthogonal test


    NO.

    A

    B

    C

    total saponins content (mg·g-1)

    total flavonoids content (mg·g-1)

    grading method

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    9

    6

    6

    6

    8

    8

    8

    10

    10

    10

    1

    1.5

    2

    1

    1.5

    2

    1

    1.5

    2

    1

    2

    3

    2

    3

    1

    3

    2

    1

    17.38

    33.15

    38.05

    41.86

    46.37

    26.62

    44.01

    23.16

    32.32

    15.68

    21.71

    26.27

    25.29

    24.77

    20.37

    23.91

    17.09

    25.37

    48.58

    77.07

    91.0

    93.3

    97.1

    67.49

    93.0

    57.49

    83.1

    K1

    K2

    K3

    R

    72.22

    86.0

    77.86

    13.75

    78.29

    77.22

    80.5

    3.310

    57.85

    84.5

    93.7

    35.85


    Table2-3. Results of analysis of variance


    Factor

    SS

    df

    MS

    F value

    Significance P

    A

    B

    C

    286.5

    17.11

    2079

    2

    2

    2

    143.2

    8.56

    1039

    9.76

    0.5830

    70.82

    0.05



    F0.01 (2,2) = 99.00 F0.05 (2,2) = 19.00

    2.1.5验证试验

    为进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性,取3份药材按上述最佳提取工艺进行验证实验,测得实验结果见表2-4

    Table2-4. Results of repeated experiments on optimized extraction technology (n =3)

    NO.

    Total saponins content(mg·g-1)

    Total flavonoids content(mg·g-1)

    1

    2

    3

    Mean

    45.51

    46.20

    46.76

    46.16

    24.91

    25.50

    24.34

    24.92



    结果表明,该工艺重复性好,结果稳定。用所选条件提取酸枣仁皂苷和黄酮含量均较高,其总皂苷含量为46.16 mg ·g-1,总黄酮含量为24.92mg · g-1
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