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液相空白出峰异常

  • Ins_1a533fe8
    2023/02/24
    • 私聊

液相色谱（LC）

  • 用离子交换柱检测mRNA，空白溶液为无酶水，流动相A为50mM HEPES pH7.0,B为50mM HEPES+20mM焦磷酸钠 pH8.5，进样前用流动相B冲洗柱子，流动相A平衡柱子，然后进三针空白，每次第一针空白的峰都比较大，第二三针就正常，样品前用B冲洗10min再用A平衡5min，样品在空白对应位置也有一个大峰，连续进样，后面样品对应位置也有峰，但是峰明显小很多，进样完成后也进空白，再走清洗程序，确保柱子冲洗干净，一直以为清洗后样品出现这一峰是因为柱子清洗干净了分离效果较好，但是几次下来每次第一针空白出现一个大峰就觉得异常，觉得流动相B的影响，求助各位老师，帮忙引导分析一下原因，万分感谢空白对比，黑色为第一针空白样品连续进样与清洗后进样对比图
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    +关注 私聊

  • xiaolanzi5

    第1楼2023/02/24

    应助达人

    流动相b我们使用50mm hepes，200mm焦磷酸钠。

0
    +关注 私聊

  • abzh99312

    第2楼2023/02/25

    进样前用流动相B冲洗柱子，流动相A平衡柱子，然后进三针空白；
    A冲、B平衡，进3针空白，将这个步骤反过来执行试试看能不能找到答案。

0
    +关注 私聊

  • Ins_1a533fe8

    第3楼2023/03/01

    200mM我们无法溶解，会析出

    xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:流动相b我们使用50mm hepes，200mm焦磷酸钠。

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  • Ins_1a533fe8

    第4楼2023/03/01

    好的，试一试，谢谢您的解答

    abzh99312(abzh99312) 发表:进样前用流动相B冲洗柱子，流动相A平衡柱子，然后进三针空白；A冲、B平衡，进3针空白，将这个步骤反过来执行试试看能不能找到答案。

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