求助！液相梯度洗脱程序优化

应助达人

梯度洗脱伴随基线漂移，一般情况下是正常现象，不需要处理。

但是梯度空白不应该存在鬼峰。 如果有，重点怀疑流动相为好。


楼主的目标物质是哪一个？详细说明样品情况为好。

应助达人

液相梯度优化，建议先采用大范围梯度，如开始几分钟采用高比例水相（95%），接下来将有机相比例提高（70%），如在此比例待测成分可以被洗脱，可以再此比例保持几分钟，如样液中还有未被洗脱的杂质，可以进一步提高有机相比例将其洗脱下来，以免污染色谱柱或者后面洗脱后干扰检测。针对您现有的梯度条件，有几点建议：一是初始比例建议增加一些有机相，C18色谱柱若未封端处理不建议纯水相跑，而且看出峰时间在三十分钟后，所以前段纯水相运行20分钟建议调整；二是流动相比例调整先大范围，确定峰位再根据出峰情况，针对某一段梯度进行细调

非常感谢！那我从开始跑程序即增加小比例的有机相也是可以的吧，然后当我确定了峰位置时再细调的时候，可以5%的比例甚至2-3%的比例调整吗？

应助达人

可以，小比例有机相开始，到大比例有机相，平衡一会，再回到初始，根据峰出现的时间和分离的情况，再调整，就把峰分离的过程和长跑比赛一起想一想，各成分就好比是运动员，管路就是跑道