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[求助]液相梯度洗脱程序优化

Ins_e0f3e175

2023/03/10

液相色谱（LC）

本人最近刚接触液相，遇到一些问题，想请教一下各位，非常感谢！
所用设备为岛津LC-20A，柱子为安捷伦的C18柱（4.6*150mm, 2.7 μm），我想通过液相来检测所制样品中的多肽成分，我一开始使用的梯度洗脱程序见图1；流动相A：0.1%三氟乙酸溶液，B：乙腈（含0.1%三氟乙酸）；柱温设置为30℃，流量为0.8 mL/min，检测波长210nm，进样量10uL。通过图1程序跑出来的样本效果很差，因为我做标品时观察到多肽在25min后才出峰，而用上述程序跑出的结果见图2，峰出现重叠，物质分不出。
然后我优化了一下梯度洗脱的程序并跑了一下液相，见图3和4
个人感觉是分开了，但基线漂移严重。想请教一下这种情况正常吗，还有梯度洗脱程序还可以怎么优化吗？感谢！

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Ins_3f92e5e1

第1楼2023/03/10

顶贴，我也遇到了类似的问题

0

安平

第2楼2023/03/10

应助达人

梯度洗脱，基线出现漂移，一般情况下是正常的，不需要处理。

但是运行梯度空白时，不应当出现鬼峰，需要注意。

楼主详细说明一下具体的样品情况为好，那个色谱峰是目标物质？

1

Ins_e0f3e175

第3楼2023/03/10

具体的样品是离心后的细菌的胞内溶出物质，有有机酸和多肽（这两个是我想要找的目标物质）；25min后出现的峰是我目前想要找的目标物质，目前还未知（需要和手里的标品进行对比）
安平(byron1111) 发表:梯度洗脱，基线出现漂移，一般情况下是正常的，不需要处理。

但是运行梯度空白时，不应当出现鬼峰，需要注意。

楼主详细说明一下具体的样品情况为好，那个色谱峰是目标物质？

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sdlzkw007

第4楼2023/03/12

应助达人

流动相组成中的三氟乙酸容易导致基线波动，另外一个考虑一下色谱柱的分离能力，有条件的话可以尝试一下液相色谱串联质谱分离检测。

1

Ins_e0f3e175

第5楼2023/03/12

好的，我试一下，谢谢！
sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:流动相组成中的三氟乙酸容易导致基线波动，另外一个考虑一下色谱柱的分离能力，有条件的话可以尝试一下液相色谱串联质谱分离检测。

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好打了卡地方

第6楼2023/03/13

梯度程序不太合理，有机相比例增加有点快

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好打了卡地方

第7楼2023/03/13

起始比例是100%A，纯水相明显不合理
好打了卡地方(Ins_b0da3c0a) 发表:梯度程序不太合理，有机相比例增加有点快

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明天会更好

第8楼2023/03/14

三氟乙酸分析多肽建议215nm或者280nm，你的梯度变化太快了，一般0.5%/min，你的色谱柱应该不是耐纯水色谱柱吧，100%水相走多了柱子会坏，建议起始10%B起步

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Ins_1b900bba

第9楼2023/03/29

前面20多分钟都没有出峰吧？如果没有出峰，你的梯度方法可以把0-20min100%三氟乙酸这一段给删掉，节省一下时间。还有你的方法从21分钟开始到41分钟结束的每一段的梯度陡度都是一样的，可以直接设(90%-50%)(21-41min)，看起来也简单明了一点。而且你的色谱柱应该不是水性柱吧，用三氟乙酸这种高酸性的溶剂做流动相而且是100%的比例洗脱很伤色谱柱的啊

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