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【讨论】柱子压力骤降,为什么?

  • 坛子西风瘦
    2007/04/27
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 本人菜鸟一只,近日进行硫酸软骨素标准实验,发现以水:乙腈=70:30清洗柱子时,0.8ml/min流速压力为80多bar,可改成流动相,乙腈:戊烷磺酸钠(10m mol/L)=10:90,大概进两个样品,10min后,压力骤降为10多bar。咱们亲爱的国标要求柱子条件为:C18(用极性小分子封尾),粒径5um,柱长250mm,内径4.6mm,我用的柱子是安捷伦滴ZORBAXA SB-C18柱,其它条件都一样。
    发现上述情况之后,俺仔细检查了一下通路,未漏!而且把流动相换成水和乙腈之后,压力又肺腑鸟!是不是用的柱子不合适,塌陷了?吓的我不敢进样了。对了对了,还有一个情况是两次进样的保留时间好像漂了!咋回事啊! 菜鸟难做啊
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  • tanggangfeng

    第1楼2007/04/27

    1)压力降10多bar,如果是稳定的,那是正常的.流动想在越接近1:1压力就越大.
    2)两次进样的保留时间好像漂 可能是柱子未平衡.多冲一会.

    tanxulin 发表:本人菜鸟一只,近日进行硫酸软骨素标准实验,发现以水:乙腈=70:30清洗柱子时,0.8ml/min流速压力为80多bar,可改成流动相,乙腈:戊烷磺酸钠(10m mol/L)=10:90,大概进两个样品,10min后,压力骤降为10多bar。咱们亲爱的国标要求柱子条件为:C18(用极性小分子封尾),粒径5um,柱长250mm,内径4.6mm,我用的柱子是安捷伦滴ZORBAXA SB-C18柱,其它条件都一样。
    发现上述情况之后,俺仔细检查了一下通路,未漏!而且把流动相换成水和乙腈之后,压力又肺腑鸟!是不是用的柱子不合适,塌陷了?吓的我不敢进样了。对了对了,还有一个情况是两次进样的保留时间好像漂了!咋回事啊! 菜鸟难做啊

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  • xionghao

    第2楼2007/04/27

    具体说也不清楚,只建议你观察一段时间看看有没有出峰,出峰正常与否;基线能不能走平.....

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  • 茅茅

    第3楼2007/04/27

    换流动相过渡时,最起码稳定30分钟以上才能进样。降10个bar是正常的。

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  • 深海的海豚

    第4楼2007/04/28

    你说得这两种流动相正常使用,不会造成柱塌陷,更换时候,25cm长柱理论上的溶剂置换体积要15~20倍柱体积,才可以完全置换。所以,如果是1.0ml/min,要80min才可以,当然,平时,40分钟也足够了。
    多平衡一会儿就好。

    tanxulin 发表:本人菜鸟一只,近日进行硫酸软骨素标准实验,发现以水:乙腈=70:30清洗柱子时,0.8ml/min流速压力为80多bar,可改成流动相,乙腈:戊烷磺酸钠(10m mol/L)=10:90,大概进两个样品,10min后,压力骤降为10多bar。咱们亲爱的国标要求柱子条件为:C18(用极性小分子封尾),粒径5um,柱长250mm,内径4.6mm,我用的柱子是安捷伦滴ZORBAXA SB-C18柱,其它条件都一样。
    发现上述情况之后,俺仔细检查了一下通路,未漏!而且把流动相换成水和乙腈之后,压力又肺腑鸟!是不是用的柱子不合适,塌陷了?吓的我不敢进样了。对了对了,还有一个情况是两次进样的保留时间好像漂了!咋回事啊! 菜鸟难做啊

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  • niazhen007

    第5楼2007/04/28

    具体问题具体分析拉!还是多看看有关书籍吧!加油!

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  • tzxm

    第7楼2007/04/28

    可能是流动相不适合柱子喽,要认真阅读柱子的使用说明书啊,柱子坏了可不是小事喽, 当然检漏也很重要,还要看你的仪器设置有没有问题

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  • 坛子西风瘦

    第8楼2007/04/28

    谢谢各位!今天我会继续寻找合适条件,昨晚冲了教长时间,压力终于稳定了,不过出峰不好。软骨素C标准品出的峰两边总有一个小肩膀,尖尖的,总也去不掉。我们这里一个牛鸟说,紫外230nm以下就比较难做了。没办法,知难而进了,希望最后能有好结果。关键对我来说,DAD检测器还是不太熟悉,里面有些基本的东西还是不太懂,更别说有些技巧了

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  • corn5672

    第9楼2007/04/28

    戊烷磺酸钠,你做的是离子对试剂,平衡时间需要长一些!!!!
    为了提高重现性,建议最好使用一根柱子固定做离子对试剂!!!!
    不要切换了,保留时间漂就是离子对试剂引起得,离子对试剂冲洗时间需要很长.(半天以上,还不一定冲洗得干净)


    tanxulin 发表:本人菜鸟一只,近日进行硫酸软骨素标准实验,发现以水:乙腈=70:30清洗柱子时,0.8ml/min流速压力为80多bar,可改成流动相,乙腈:戊烷磺酸钠(10m mol/L)=10:90,大概进两个样品,10min后,压力骤降为10多bar。咱们亲爱的国标要求柱子条件为:C18(用极性小分子封尾),粒径5um,柱长250mm,内径4.6mm,我用的柱子是安捷伦滴ZORBAXA SB-C18柱,其它条件都一样。
    发现上述情况之后,俺仔细检查了一下通路,未漏!而且把流动相换成水和乙腈之后,压力又肺腑鸟!是不是用的柱子不合适,塌陷了?吓的我不敢进样了。对了对了,还有一个情况是两次进样的保留时间好像漂了!咋回事啊! 菜鸟难做啊

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  • 坛子西风瘦

    第10楼2007/04/28

    多谢多谢!我再多实验一下。

    corn5672 发表:戊烷磺酸钠,你做的是离子对试剂,平衡时间需要长一些!!!!
    为了提高重现性,建议最好使用一根柱子固定做离子对试剂!!!!
    不要切换了,保留时间漂就是离子对试剂引起得,离子对试剂冲洗时间需要很长.(半天以上,还不一定冲洗得干净)


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