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第1楼2024/10/22
蛋白质溶液用硫酸铵沉淀后进行透析除盐,需要以下装置和试剂:
装置:
透析袋:这是透析的核心装置,具有半透膜性质,允许小分子如盐离子、水等通过,而大分子蛋白质则不能通过。透析袋有不同的规格和截留分子量,需要根据蛋白质的大小和实验需求选择合适的透析袋。一般来说,常用的透析袋分子量截留范围在 1000 - 10000 道尔顿左右。
透析夹:用于密封透析袋的两端,防止蛋白质溶液和透析液泄漏。透析夹要选择密封性好、夹力适中的,以确保透析过程的顺利进行。
大容器:用于盛放透析液,如烧杯、塑料桶等。容器的大小要根据透析液的体积和透析袋的数量来选择,要保证透析袋能够完全浸泡在透析液中。
磁力搅拌器和搅拌子:如果条件允许,使用磁力搅拌器和搅拌子可以保持透析液的均匀混合,提高透析效率。搅拌速度不宜过快,以免对透析袋造成损坏。
支架:用于固定透析袋,使其保持在透析液中的合适位置。支架可以是简单的夹子或专门的透析支架。
试剂:
透析液:一般使用蒸馏水或缓冲液作为透析液。蒸馏水可以去除盐离子,但如果蛋白质对 pH 值或离子强度敏感,可能需要使用特定的缓冲液来维持透析过程中蛋白质的稳定性。常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液(PBS)、 Tris-HCl 缓冲液等。缓冲液的浓度和 pH 值要根据蛋白质的性质和实验要求进行选择。
经验分享:
透析前准备:
透析袋的处理:新的透析袋需要在使用前进行预处理。将透析袋剪成适当的长度,放入蒸馏水中煮沸 5 - 10 分钟,然后用蒸馏水充分冲洗,以去除可能残留的化学物质。处理后的透析袋可以在 4℃下保存备用。
蛋白质溶液的处理:将硫酸铵沉淀后的蛋白质复溶,确保蛋白质溶液均匀,没有未溶解的颗粒或沉淀。如果溶液中有不溶性物质,可能会影响透析效果或损坏透析袋,因此需要通过离心等方法去除。
透析过程:
装样:将处理好的蛋白质溶液小心地倒入透析袋中,注意不要装得太满,留出一定的空间,以便透析袋在透析过程中能够自由膨胀。然后用透析夹将透析袋的两端密封好。
透析:将装有蛋白质溶液的透析袋放入盛有透析液的大容器中,确保透析袋完全浸泡在透析液中。如果使用磁力搅拌器,调整搅拌速度至适当水平。透析过程中需要定期更换透析液,以提高除盐效果。一般每隔 2 - 4 小时更换一次透析液,更换 3 - 5 次左右可以达到较好的除盐效果。
温度控制:透析过程最好在低温下进行,如 4℃左右的冰箱中,这样可以降低蛋白质的降解和变性风险。
透析后处理:
透析结束后,取出透析袋中的蛋白质溶液,进行后续的分析或实验。可以通过适当的方法,如紫外分光光度法、SDS-PAGE 等,检测蛋白质的浓度和纯度,以确定透析除盐的效果。
清洗和保存装置:透析结束后,将透析袋用蒸馏水冲洗干净,然后晾干或用滤纸吸干水分,保存备用。大容器和其他装置也需要清洗干净,晾干后保存,以备下次使用。