乳制品中维生素C检测
1.维生素C简介
维生素C是一种水溶性维生素;
维生素C是一种具有六个碳原子的酸性多羟基化合物;
维生素C分子式为C6H8O6其分子式中2位和3位碳原子的两个烯醇式羟基容易解离,释放出H+,因此维生素C是酸性的;
维生素C自身可发生氧化还原反应,氧化型抗坏血酸和还原型脱氢抗坏血酸可以互相转变。
2.维生素C的性质:
极易溶于水及乙醇;
维生素C在酸性溶液中比在碱性溶液中稳定;
极易受碱性、光照、氧化剂、射线、盐和糖浓度、酶等因素影响。(本实验应该避光操作)
3.维生素C检测方法及相关国标
1、荧光分光光度法GB/T 5413.18
2、2,6-二氯靛酚滴定法GB 5009.86
4.荧光分光光度计法
一、实验原理:
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测得食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
二、试剂作用:
1)偏磷酸-乙酸溶液A/偏磷酸-乙酸溶液B:作为维生素C的提取液,为了减慢维生素C的氧化速度,防止维生素C氧化损失,减少实验误差。(维生素C极易在空气中氧化,尤其是在碱性条件下,而在酸性介质中它受空气氧化的速度和程度稍慢且稳定)
2)酸性活性炭:起到氧化剂和吸附剂的作用。
氧化剂作用:还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸
吸附剂作用:脱色
国标中规定酸性活性炭的用量为2g,能够使测定样品中维生素C完全氧化且吸附作用不是很明显。
3)乙酸钠溶液:乙酸钠溶液在加入后存在于溶液中时间越长,荧光强度值就越低,从而降低了方法的灵敏度。
4)硼酸-乙酸钠溶液(掩蔽剂):硼酸与脱氢抗坏血酸可形成不与领苯二胺反应的络合物,以此排除样品中荧光杂质(丙酮酸)所产生的干扰。
5)邻苯二胺:脱氢型抗坏血酸,与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉。此溶液要临用新制,且避光。
注意:国标规定加入硼酸-乙酸钠溶液后,应静置30分钟,之后再定容至刻度。这样做的目的是使空白荧光强度值能够降低到最低值
三 操作过程
1)样品经过偏磷酸-乙酸溶液B定容,加入2g酸性活性炭后剧烈振摇后状态。
总结荧光分光光度计法优点
1)灵敏度高;
2)线性关系好;
3)精密度高;
4) 不受其他荧光杂质的干扰。