仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
1
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
基因测序仪
>
帖子详情
蛋白纯化的目的、原理及蛋白纯化的4种方法详解
Ins_bf0c01c3
2023/08/16
私聊
基因测序仪
蛋白质是包括人类在内的各种生物有机体的重要组成成分,是生命的物质基础之一。生物体的生长、发育、遗传和繁殖等一切生命活动都离不开蛋白质。
随着分子生物学、结构生物学、基因组学等研究的不断深入,人们意识到仅仅依靠基因组的序列分析来试图阐明生命活动的现象和本质是远远不够的。只有从蛋白质组学的角度对所有蛋白质的总和进行研究,才能更科学地掌握生命现象和活动规律,更完善地揭示生命的本质。
由此许多学者将生命科学领域的研究焦点从基因转向蛋白质,使蛋白质成为揭示生命活动现象和分子生物学机理的重要研究对象。研究蛋白质首要的步骤是将目的蛋白从复杂的大分子混合物中分离纯化出来,得到高纯度具有生物学活性的目的物。因此,高效的纯化技术和手段是蛋白质研究的重要基础和关键之一。
蛋白纯化的目的
蛋白纯化的目的是将目标蛋白质从细胞裂解液的全部组分中分离出来,同时仍保留蛋白的生物学活性及化学完整性。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,需根据蛋白的特性选择合适的纯化方法来提高获得的蛋白制品的纯度。
蛋白纯化的原理
不同蛋白质的氨基酸序列及空间结构不同,导致其在物理、化学、生物学等性质上存在差异,利用待分离蛋白质与其它蛋白质性质上的差异,即可以设计出一套合理的蛋白纯化方案。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如
RNA
、
DNA
等分开,常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来,
常用的方法有:凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。
①
凝胶过滤层析
凝胶过滤层析(又叫做分子筛)是根据样品的分子大小对样品进行分离的一种简单温和的层析技术。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析,是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。不同于离子交换层析和亲和层析,凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合,因此,缓冲液成分不直接影响分辨率。
原理:层析柱中的填料是球状颗粒的惰性的多孔网状结构的柱料,多是交联的聚糖
(
如葡聚糖或琼脂糖
)
类物质。在加入样品之后,样品中的小分子物质能进入球状填料内部,在柱子中停留时间较长;而大分子物质不能进入球状填料内部,停留时间较短。所以当样品经过凝胶过滤层析柱分离后,样品中的不同分子大小的物质就可以被分离开了。
特点:
根据分子大小和形状进行分离
是一种非吸附的分离方式
缓冲液成分不直接影响分辨率,只需要一种缓冲液
操作便捷
②
离子交换层析
离子交换层析是目前蛋白质分离纯化中应用最广泛的方法之一。
原理:不同蛋白等电点差异,分子大小差异,在同一个流动相中电荷密度分布不同,电荷量不等,与具有相反电荷的离子交换介质结合强度不同,在流动相洗脱时保留时间不同,从而得以分离。
特点:
根据分子大小和等电点差异进行分离
灵敏度高,重复性,选择性好,分析速度快
③
疏水层析
原理:疏水层析是依据蛋白质疏水性差异分离的。即根据蛋白质和疏水介质表面的疏水基团的可逆相互作用进行分离。蛋白的疏水性在高离子强度下被增强,因此在高离子强度环境中结合,通常采用降低离子强度的方式进行洗脱。独特的吸附分离模式使得疏水层析成为硫酸铵盐析后或离子交换高盐洗脱后理想的纯化方式。
特点:
采用了盐的水溶液作为流动相,色谱条件温和,生物大分子的活性回收率很高。
蛋白质在
HIC
操作过程中是高盐上样,低盐洗脱(高盐浓度的样品不必作处理就可直接上样)。
在一次色谱中可同时实现出去盐酸胍、蛋白质复性和分离三个目的。
温度升高,蛋白质天然折叠伸展,暴露出更多内部疏水集团,使蛋白质的
HIC
保留发生变化。
色谱填料稳定性好,盐水体系作流动相无环境污染。
④
亲和层析
原理:
亲和层析
是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶
-
底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子,抗体
-
抗原,激素
-
受体蛋白、载体蛋白,外源凝集素
-
多糖、糖蛋白、细胞表面受体,核酸
-
互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等,具有高效、简单、快速的优点,是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。
更多详情可以参看蛋白纯化技术
/
方法:
https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques
相关话题
1
CAR-T细胞制备-慢病毒包装包含哪些?
2
利用MGI平台对大豆进行全基因组重测序分析
3
什么仪器可以用作DNA转录
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
蛋白纯化的目的、原理及蛋白纯化的4种方法详解
分享
2023/08/16
广州国际智慧物业博览会
原创
2022/12/12
什么仪器可以用作DNA转录
求助
2024/07/02
生命基因在微重力环境下的变化SPHEROSTAT和AJ001X
求助
2023/02/11
ABI基因分析仪
讨论
2022/03/02
利用MGI平台对大豆进行全基因组重测序分析
原创
2023/10/30
CAR-T细胞制备-慢病毒包装包含哪些?
分享
2023/08/17
基于TILLING技术的基因突变分析
第十五届原创
2022/09/01
什么仪器可以用作DNA转录
求助
2024/07/02
利用MGI平台对大豆进行全基因组重测序分析
原创
2023/10/30
CAR-T细胞制备-慢病毒包装包含哪些?
分享
2023/08/17
蛋白纯化的目的、原理及蛋白纯化的4种方法详解
分享
2023/08/16
生命基因在微重力环境下的变化SPHEROSTAT和AJ001X
求助
2023/02/11
广州国际智慧物业博览会
原创
2022/12/12
基于TILLING技术的基因突变分析
第十五届原创
2022/09/01
ABI基因分析仪
讨论
2022/03/02
实验室检测记录能否使用Excel保存
求助
2024/06/28
仪器点火失败
求助
2024/06/28
求助,非甲烷总烃测定中,除烃空气0.4mg/m3,怎么计算的呢?是按总烃计算公式吗?
求助
2024/06/29
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
衍射斑点标定求助
求助
2024/06/30
请您欣赏国风酒庄
分享
2023/08/16
常用的蛋白标签的功能和优点有哪些?
分享
2023/08/16
XRF 光谱 能谱
讨论
2023/08/16
举报帖子“环境环保中、高工找工作 地区不限 中介勿扰”
2023/08/16
环境环保中、高工找工作 地区不限 中介勿扰
咨询
2023/08/16
物理化学手册
分享
2023/08/16
食品安全分析仪有什么作用
求助
2023/08/16
icpms7500 氩气流量上不去
已应助
2023/08/16
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...