液相分离度

应助达人

楼主详细说明具体分析条件为好，什么样品什么色谱柱，什么流动相？

既然其他组分都没有问题，那么建议考虑是否样品不良，样品前处理有问题或者色谱柱选型不良。

应助达人

流动相有没调pH，加缓冲盐，是在线混合还是手动混合呢？手动混合如果在瓶子里配要注意不同的瓶子，刻度有差异，会导致实际体积有差异。
系统是否充分的平衡好了。
样品的配制是否一样，溶剂有没调pH。对于pH敏感的样品，要用惰性处理过，金属含量低的瓶子

色谱条件是：A相0.04M磷酸二氢钾（pH6.5）-乙腈（85：15）；B相0.04M磷酸二氢钾（pH6.5）-乙腈（50:50）
色谱柱：GL sciences 4.6*250mm 5μm
样品是一个冻干制剂，配的系统适用性溶液

有缓冲盐，调了pH，溶剂和流动相A是一致的（0.04M磷酸二氢钾（pH6.5）-乙腈（85:15）），手动混，跑梯度；是否是pH敏感还没试验过

myoldid(v2963297) 发表:流动相有没调pH，加缓冲盐，是在线混合还是手动混合呢？手动混合如果在瓶子里配要注意不同的瓶子，刻度有差异，会导致实际体积有差异。
系统是否充分的平衡好了。
样品的配制是否一样，溶剂有没调pH。对于pH敏感的样品，要用惰性处理过，金属含量低的瓶子

应助达人

首先要确保pH，比例准确。用量筒分别量取，不要在瓶子里加了A，再加B来配。安捷伦的一次讲座里提到了，流动相瓶子，样品瓶子，对一些对金属，pH敏感的样品也有影响。另外跑了梯度，可以调出前面的梯度压力曲线和现在的对比一下，是否是压力有轻微变化呢

学习学习！

保留时间有没有变化呢？

压力没有变化