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常用的抗体亲和力成熟技术有哪些?
Ins_bf0c01c3
2023/08/17
私聊
生命科学仪器综合讨论
根据体内抗体亲和力成熟原理,在体外抗体亲和力成熟过程中,选择突变区域以及如何引入突变是一个关键问题,目前的突变策略主要分为三大类,随机突变、置换和定向突变。
①易错
PCR
易错
PCR
是目前最常用的抗体突变技术,可以在抗体基因的全长或部分区域随机引入突变。在聚合酶对目的
基因扩增
时,通过应用错配率高的聚合酶或调整反应条件等,以一定的频率向目的基因中随机引入突变,并通过多轮
PCR
反复进行随机诱变,累计突变效应,最终获得目的蛋白的随机突变体。
②链置换
链置换是保留某个特定抗体的重链或轻链,另一条链与一个随机化的互补链进行组合,从中筛选更高活性的突变株。通过固定抗体两条链中的一条链,对另一条链构建具有足够多样性的置换文库,随机组合有可能产生最佳链组合,经过噬菌体抗体库筛选可获得高亲和力的新抗体。链置换策略常采用轻链替换。
③定点突变
由于天然抗体在亲和力成熟过程中,体细胞高频突变发生区域并非均匀分布,而是主要集中在与抗原直接接触的
CDR
区。在抗体的亲和力体外成熟过程中,
CDR
区是最常选用的定点突变区域,这样既可以获得足够的序列多样性,又不会破坏蛋白质结构。对
CDR
进行定点突变时,可以对多个
CDR
进行平行突变或进行逐步优化。
④
DNA
改组
DNA
改组技术是对同源的抗体基因,采用脱氧核糖核酸酶Ⅰ将其切割成不超过
50bp
的片段,再随机组合后进行
PCR
扩增成完成的抗体基因的技术。它包含了抗体片段随机化切割、重组和筛选的过程,一定程度上模拟了天然抗体的亲和力成熟过程,并加快了体外定向进化速度。
Tips:
1
、在链置换中为什么通常替换的都是轻链?
答:因为抗体重链在抗结合活性和结构方面比较重要,所以链置换策略常采用轻链替换,以尽量避免链替换后抗体结合特异性发生变化。
2
、抗体库技术与单、多抗技术相比,有何优劣?
答:优势:抗体库技术筛选范围大、实验周期短、操作简单、不许进行免疫操作、可应用于大规模生产劣势:亲和力弱,不易激发人体的抗原
-
抗体反应。临床应用受限较大。
义翘神州提供
抗体亲和力成熟服务
,服务内容及流程可以查看:
https://cn.sinobiological.com/services/antibody-affinity-maturation-service
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