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ELISA类型有哪些？ELISA常见问题解析

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2023/08/30

生命科学仪器综合讨论

酶联免疫吸附试验 (ELISA) 是一种经典的、最常用的免疫检测方法。它是通过抗原和抗体或配体和受体的特异性结合对免疫反应进行定性和定量检测。义翘神州生产的7000+ ELISA抗体，特异性和敏感性高，包括一抗、二抗、标记抗体、对照抗体等。其中，小鼠杂交瘤单克隆抗体1200余种，兔单克隆抗体及重组单克隆抗体1600余种，多克隆抗体4100余种。这些抗体均经过严格的质量控制，以确保实验的稳定性和可重复性。义翘神州提供ELISA检测服务。下面是具体的常见问题解析：

1、ELISA类型有哪些？

①间接ELISA

间接ELISA是一种两步法ELISA，涉及一抗和标记二抗的两个结合过程。将一抗与抗原一起孵育，然后与二抗一起孵育。然而，由于二抗可能带来的交叉反应，该过程可能产生非特异性信号。

②直接ELISA

起初，在直接ELISA实验（被认为是最简单的ELISA方法）中，抗原吸附到塑料板上，随后加入过量的另一种蛋白（通常为牛血清白蛋白）阻断所有其他结合位点。当酶在单独的反应中与抗体连接时，酶-抗体复合物被用于吸附抗原。洗去多余的酶-抗体复合物后，留下与抗原结合的酶-抗体。加入酶反应的底物，检测到的酶代表抗原信号。

然而，对比直接ELISA与间接ELISA，在间接ELISA中，步骤相似，但存在较大差异，还有一个额外步骤。抗原吸附到ELISA板上，BSA封闭后，加入识别抗原的抗体（该抗体上没有连接酶）。然后，制备酶-抗体结合物，将其加入到ELISA板中，并检测吸附到抗原上的抗体（在直接ELISA中，酶-抗体结合物直接吸附到抗原上），然后加入底物，检测酶的存在，进而检测抗原。因此，在间接ELISA中，酶-抗体结合物中的抗体是检测抗原的抗体的抗体，类似于三明治结构。

③竞争ELISA

竞争ELISA的核心在于由原始抗原（样本抗原）和附加抗原的竞争性结合过程。与间接ELISA、夹心ELISA和直接ELISA相比，竞争性ELISA的步骤在某些方面存在一些差异。

④夹心ELISA

2、ELISA的优势是什么？

与其他免疫分析方法相比，ELISA有很多优点：ELISA检测更为准确，且具有高灵敏度和特异性；与其他用于体内检测物质的方法（如放射免疫测定，RIA）相比，具有更明显的优势。此外，ELISA还具有如无需放射性同位素（放射性物质）或昂贵的辐射计数器（辐射计数装置）等其他优势。

3、如何保存义翘神州的ELISA抗体？

分析说明书上列出了具体的保存建议。我们建议将所有抗体进行分装后保存在-20°C或以下，避免多次冻融，以免影响抗体活性。如果抗体未按说明书规定存储，我们将无法确保其性能。

4、义翘神州ELISA抗体的保质期是多久？

除非说明书中另有说明，我们的大多数抗体产品可以在2℃-8℃下保存1个月，而不影响检测活性；在-20℃-70℃条件下保存时，从签收日期算起，抗体可以稳定存放12个月（注：应避免反复冻融）。

5、义翘神州的ELISA抗体是如何供应的？

义翘神州的所有ELISA抗体均以液体形式提供。在环境温度下，产品在运输过程中保持稳定。我们在-20°C、室温以及37°C温度条件下，对每种抗体的稳定性和活性进行了测试，持续时间超过7天。在这三种条件下，抗体都具有同样的活性和稳定性。

6、ELISpot检测的一般步骤是哪些？适用于哪些细胞的检测？

淋巴细胞受到抗原刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被ELISpot板底PVDF 膜上（预包被的）的特异性单抗捕获。去除细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。加底物显色后，PVDF 膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPot Reader对斑点的进行计数和分析。

理论上讲，所有能分泌细胞因子的细胞都可以用ELISpot进行检测分析。实际应用中常见的检测细胞类型包括：外周血淋巴细胞（PBMC）、骨髓、或者中枢神经系统和淋巴组织的单细胞悬液。

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