量子点荧光微球偶连BSA完全抗原的方法

量子点荧光微球偶连 BSA 完全抗原的一种常见方法如下：
量子点荧光微球的清洗：
一般取适量的量子点荧光微球（比如，从浓度为 10mg/ml 的微球溶液中取 100μl），标记目标量的 BSA 完全抗原（具体量需根据实验摸索确定）。
将微球与适量的标记缓冲液混合，例如加入 900μl 的标记缓冲液（50mM MES，pH6.0，或者 0.05M PBS，pH6.0）。
进行两次高速离心操作，每次离心条件为 17000rpm，离心 20min。离心后去掉上清液，再用 1000μl 标记缓冲液重悬微球。
微球的活化：
称取适量的 N - 羟基琥珀酰亚胺（NHS）和 1 - 乙基 -(3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亚胺（EDC），用标记缓冲液溶解配制成浓度较高的溶液（如 20mg/ml），现用现配。
取一定量的 NHS 溶液（如 20μl）加入到清洗后的微球中，快速混匀；然后再加入适量的 EDC 溶液（如 5μl），快速混匀；室温孵育 20 - 30min，使微球表面的羧基被活化。
清洗去除残留的 EDC：
活化完成后，再次进行高速离心操作，步骤与清洗微球时类似。离心后去掉上清液，用 1000μl 标记缓冲液重悬微球，备用。
微球与 BSA 完全抗原的偶联：
将 BSA 完全抗原溶解于合适的缓冲液（如 50mM MES，pH8.5，或者 0.05M PBS，pH8.5）中。
取适量活化后的微球，加入溶解好的 BSA 完全抗原溶液，快速混匀后，室温孵育数小时（一般为 3 小时左右），使 BSA 完全抗原与量子点荧光微球偶联。
封闭：
配制浓度较高的 BSA 溶液（如 20mg/ml），即称取适量 BSA，用终浓度 100mM 的乙醇胺溶液充分溶解，备用。
在微球与 BSA 完全抗原偶联后，加入适量的上述封闭液，室温孵育 1 小时，以封闭微球表面未反应的活性位点。
去除未结合的抗原：
通过高速离心的方法去除游离的未结合微球的 BSA 完全抗原。离心后去掉上清液，用适量的稀释液（如 50mM PBS，pH7.4 或 50mM Tris，pH8.0）重悬微球，即得到量子点荧光微球偶连 BSA 完全抗原的复合物。
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