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Myc标签序列及常见问题解析
Ins_bf0c01c3
2023/09/19
私聊
生命科学仪器综合讨论
Myc
标签是来源于
c-myc
基因产物的多肽蛋白标签,可以通过重组
DNA
技术融合到蛋白的
C
端或
N
端。它可以促进标签蛋白的亲和纯化以及标签蛋白的分离和检测。
Myc
标签的多肽序列是:
EQKLISEEDL
(或写作
-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-
)。
Myc
标签包含
10
个氨基酸,
Myc
标签(
EQKLISEEDL
标签)多肽的分子量是
1202 Da
。
Myc
标签实验中常见的问题解析:
1
、流穿中有目的蛋白
①填料过载
推荐解决方案:减少上样体积或增加填料体积。
②结合时间太短
推荐解决方案:延长样品和填料的结合时间,可过夜孵育。
③标签未暴露
推荐解决方案:可以加入低浓度的变性剂,上样前透析。
④溶液中试剂不兼容
推荐解决方案:样品上样前进行透析。
2
、洗脱组分中没有目的蛋白
①目的蛋白不稳定
推荐解决方案:使用新鲜样品、低温操作、细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
②目的蛋白表达量太低
推荐解决方案:优化蛋白表达量、增加上样量,减少缓冲液中
NaCl
浓度。
③样品中无标签融合蛋白
推荐解决方案:纯化前
Western
检测是否有
c-myc
标签蛋白
3
、背景太高
①非特异性吸附
推荐解决方案:最后一次洗杂后,填料转到新的管子里再洗脱或
IP
。
②洗杂不充分
推荐解决方案:增加洗杂次数,每次清洗孵育
5-10min
、增加洗杂液中盐离子浓度。
4
、纯化后,如何裂解
Myc
标签?
在某些应用场景希望可以去除
Myc
标签,例如用于蛋白的结晶。为了允许
Myc
标签裂解,需要在标签和蛋白之间设计一个蛋白酶裂解位点。在
Myc
标签后面的
EK
裂解位点(
Myc-EK
位点
-
蛋白结构)可以使
Myc
标签和裂解位点完全去除,在
Myc
标签的特异裂解后不留下任何额外的氨基酸。关于
EK
和
HRV-3C
蛋白酶的裂解位点和标签去除的更多信息。
Myc
标签
(
EQKLISEEDL
标签)已广泛应用于重组蛋白的表达和生产。
Myc
标签允许使用连接在琼脂糖珠上的
Myc
标签特异性抗体对被标记的蛋白进行简单而有效的亲和纯化。
Myc
标签(
EQKLISEEDL
标签)也可通过使用
Myc
标签特异性抗体用于
western blot
检测。可以添加
Myc
标签到蛋白的
C
端或
N
端,用于在几乎所有的表达系统中表达。
义翘神州已成功生产许多
Myc
标签蛋白,并通过
Myc
标签亲和色谱法进行纯化。义翘神州在根据蛋白结构设计
Myc
标签方面具有丰富的经验,并可处理蛋白纯化过程中出现的任何问题。义翘神州还开发了高灵敏度的
Myc
标签(
EQKLISEEDL
标签)特异性抗体,用于
western blot
、
ELISA
、免疫荧光和免疫沉淀检测。义翘神州也开发了自己的
Myc
标签(
EQKLISEEDL
标签)亲和纯化树脂。详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/myc-tag-protein-production
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