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生物素标记蛋白方式有哪些?Avi-Tag+化学标记方式介绍
Ins_bf0c01c3
2023/09/21
私聊
生命科学仪器综合讨论
义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品,拥有
Avi-tag
定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白,覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势,适用于
ELISA
、
Biopanning
、
SPR / BLI
等实验。
Avi-Tag
生物素标记蛋白:
Avi-tag
重组蛋白融合一个额外的
15
个氨基酸序列,即
Avi-tag
,通常连接至蛋白的
N-
或
C-
末端。
Avi-tag
肽段被大肠杆菌生物素连接酶
BirA
所识别,
BirA
连接酶通过酶促反应将生物素连接到
Avi-tag
序列内的单个赖氨酸残基。因此,
Avi
标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化,从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性,并且由于
Avi
标签位于蛋白的末端,因此对蛋白活性的影响通常很小,有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。
生物素与链霉亲和素
/
亲和素(
SA
)之间的强非共价相互作用,具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种
Avi-tag
生物素标记的重组蛋白。
产品优势:
? 高生物活性,经
ELISA
、
SPR
、
BLI
等验证
? 多种属,覆盖细胞治疗、抗体、
Fc
受体等热门靶点
? 高批间一致性
化学标记生物素蛋白:
化学标记法,是将蛋白
N-
末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合,通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、
tag free
等特点,是常用的生物学方法之一。
产品优势:
? 高信号强度,每个蛋白分子通常平均含有多个生物素,有助于对其检测。
? 标记方法简单,检测灵敏度高。
? 高生物活性,
ELISA
、
SPR
等验证,批间一致性高
生物素标记蛋白应用:
1
、用于生物素标记的三种天然产物分子探针的设计与合成研究
从中药中提取分离得到的天然产物具有结构多样、药理作用广泛的特点,常被用来作为先导化合物开发新药,因此需要对其具体作用机制进行研究。天然产物药理作用广泛对应着多靶点的特性,但其靶标蛋白的难以确定也阻碍了人们对其的进一步研究与开发。
基于亲和性蛋白组学分析方法(
Affinity-based Protein Profiling,ABPP
)是基于活性小分子与靶标蛋白之间的亲和作用,在活性小分子上引入报告基团,利用亲和层析技术可以将靶标蛋白进行分离的一种方法,其作为一种十分有效的工具被广泛应用于天然产物靶标蛋白的发现。
选取三个从中药中提取分离得到的活性天然小分子,设计合成相应的小分子探针,旨在为它们靶标蛋白的发现以及作用机制的研究提供一个有效的工具,具体内容如下:
1
、对目前主要的用于天然小分子的靶标蛋白鉴定方法进行了介绍,且着重介绍了
ABPP
方法及其在天然产物靶标蛋白鉴定的应用。
2
、以薯蓣皂苷元和生物素为原料,经过酯化、酰胺化、取代、水解反应等步骤分别合成含有长臂亲脂性链和亲水性链的薯蓣皂苷元生物素标记探针
3
和
8,
并以
MTT
法对其进行抗肿瘤活性评价。实验得到的探针分子、重要中间体用
MS
、
1H-NMR
、
13C-NMR
表征,确认所得化合物结构与目标化合物一致。细胞活性实验结果表明合成的探针分子
3
和
8
具有与薯蓣皂苷元相当的抗肿瘤活性,且对探针分子标记的靶标蛋白进行电泳分析,发现了三条薯蓣皂苷元可能特异性作用的蛋白条带,这些结果都为后续薯蓣皂苷元抗肿瘤靶标蛋白的发现奠定基础。
更多详情可以关注义翘神州
生物素标记蛋白
https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite
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